摘要:目的:利用PiggyBac转座子系统,构建可诱导表达Cas9的稳定Hela细胞系,并针对人核受体基因构建sgRNA文库,进行顺铂耐药性基因筛选。方法:构建PB-TRE-Cas9-NLS-IRES-hrGFP-Zeo载体,和PB-CAG-rtTA,以及转座酶载体一同电转到Hela细胞中,通过药筛和挑选单克隆得到稳定细胞系;构建核受体基因sgRNA病毒文库,并感染可诱导表达Cas9的Hela细胞系,筛选对顺铂具有抵抗性的克隆,并进行目的基因的测序鉴定。结果:挑选出的可诱导表达Cas9的8E单克隆细胞株,在5个基因位点上可以进行高效编辑;感染sgRNA文库之后,可以挑选到顺铂耐药性的克隆,并鉴定到VDR基因。结论:利用PiggyBac转座子系统,构建了可诱导表达Cas9的稳定Hela细胞系,利用这个细胞系可以在多位点进行高效基因编辑,并可用于高通量文库筛选。