江苏省卫生厅自然科学基金资助项目（Z200314）
目的：探讨环氧合酶-２（ＣＯＸ-２）选择性抑制剂塞莱昔布（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）对血管平滑肌细胞的增殖抑制作用及分子机制。方法：给予原代培养的大鼠平滑肌细胞不同浓度的ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ处理， ＷＳＴ-１细胞增殖实验观察细胞的生长抑制作用；流式细胞术检测凋亡；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法检测血管平滑肌细胞ＣＯＸ-２的表达、ｃａｓｐａｓｅ-３蛋白的裂解激活、磷酸化Ａｋｔ的表达。结果：ＷＳＴ-１实验结果显示，经０、６．２５、１２．５０、２５．００、５０．００ μｍｏｌ／Ｌｃｅｌｅｃｏｘｉｂ作用２４ ｈ后，细胞的增殖率分别为１００％、８１．１５％、６６．７２％、５４．９３％和１１．４１％；５０ μｍｏｌ／Ｌ ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ作用２４ ｈ后，流式细胞仪检测细胞凋亡率为３０．７２％；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ实验显示，血管平滑肌细胞中ＣＯＸ-２有表达，ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ作用于细胞后ｃａｓｐａｓｅ-３蛋白裂解片段激活，磷酸化Ａｋｔ的表达减弱或消失。结论：ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ对血管平滑肌细胞有增殖抑制和凋亡诱导作用，其机制可能部分涉及到Ａｋｔ／ｃａｓｐａｓｅ途径。
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ-２（ＣＯＸ-２） ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ＷＳＴ-１ ａｓｓａｙ． Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ-２， ｃａｓｐａｓｅ-３ ａｎｄ Ａｋｔ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ（０-５０μｍｏｌ／Ｌ） ｆｏｒ ２４ ｈｏｕｒｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｗａｓ １００％，８１．１５％，６６．７２％，５４．９３％ ａｎｄ １１．４１％， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｃｉｃ ｒａｔｉｏｎ ｏｆ ５０ μｍｏｌ／Ｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ３０．７２％． Ｔｈｅ ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｓｐａｓｅ-３ ａｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｋｔ（Ｔｈｒ３０８） ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ ｄｏｓｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ， ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｐａｒｔｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａｋｔ／ｃａｓｐａｓｅ ｐａｔｈｗａｙ．
娄可心,刘宁波,彭韬,冷 静.选择性环氧合酶抑制剂ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ对血管平滑肌细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用和分子机制[J].南京医科大学学报（自然科学版）,2007,(6):530-533
