文章摘要
胡子有,漆松涛,张〓遐,曹〓琼,吴炳义.阿片受体μ-Myc-pIRES2-EGFP的构建及其在CHO细胞中的表达[J].南京医科大学学报,2010,(2):179~182
阿片受体μ-Myc-pIRES2-EGFP的构建及其在CHO细胞中的表达
Construction of μ-Myc-pIRES2-EGFP and its expression in CHO
  
DOI:10.7655
中文关键词: μ型阿片受体  pIRES2-EGFP  CHO
英文关键词: μ opioid receptor  pIRES2-EGFP  CHO
基金项目:国家自然科学基金海外青年学者合作研究基金资助项目(30628018)
作者单位
胡子有 南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广东 广州〓510515 
漆松涛 南方医科大学南方医院神经外科,广东 广州〓510515 
张〓遐 Institute of Mental Health Research,University of Ottawa,Ottawa Canada 
曹〓琼 南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广东 广州〓510515 
吴炳义 南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广东 广州〓510515 
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中文摘要:
      目的:构建带Myc标签的大鼠μ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(μ-Myc-pIRES2-EGFP),并实现其在CHO细胞中的表达?方法:以含大鼠全长μ阿片受体基因的μ-pMD20 T载体为模板,通过引物设计和扩增,在μ基因C端引入Myc标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,将获得的μ-Myc-pIRES2-EGFP转染入CHO细胞中,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并用细胞免疫荧光和蛋白印迹检测μ-Myc的表达?结果:测序及酶切结果表明获得带Myc标签的μ基因,构建入pIRES2-EGFP表达质粒中,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光,应用免疫荧光和蛋白印迹观察到目的基因表达?结论:成功构建了μ-Myc-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达?
英文摘要:
      Objective:To construct the μ-Myc-pIRES2-EGFP plasmid and investigate its expression in CHO. Methods:μ gene was tagged with a 10-residue Myc epitope through PCR. Then the μ gene with Myc epitope was inserted into pIRES2-EGFP to form μ-Myc-pIRES2-EGFP recombinant eukaryotic plasmid. The μ-Myc-pIRES2-EGFP plasmid was transfected into CHO using Lipofectamine2000. The expression of μ-Myc-pIRES2-EGFP was examined by the fluorescence microscopy and Western blot. Results:The sequence of μ opioid receptor with Myc epitode was inserted into pIRES2-EGFP and confirmed by sequencing. High expression of EGFP and μ gene with Myc epitope was detected in CHO after μ-Myc-pIRES2-EGFP plasmid transfection. Conclusions:μ-Myc-pIRES2-EGFP was cloned correctly and expressed in high level in CHO cells.
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