摘要:目的:构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-assoliated herpesvirus,KSHV)致瘤基因vIL-6的重组分泌型质粒,将其导入内皮细胞系EA.hy926中进行表达,并检测vIL-6对内皮细胞增殖和血管生成作用的影响-方法:根据本实验室先前构建的pvIL-6 F表达载体中的核酸序列设计PCR引物,在其5′端及3′端分别引入HindⅢ和XhoⅠ酶切位点,PCR扩增vIL-6基因,经双酶切纯化后将其克隆入分泌型真核表达载体pSecTag2B中-重组质粒经核酸测序鉴定后转染EA.hy926细胞,以Western blot检测vIL-6基因的表达情况;另外收集重组分泌型质粒转染293T细胞后的上清,通过细胞增殖实验和微管形成实验分别检测vIL-6通过自分泌或旁分泌方式对内皮细胞增殖和血管生成作用的影响-结果:限制性内切酶鉴定和基因测序证实成功构建了含KSHV vIL-6基因的重组分泌型质粒pSecTag2B-vIL-6,此质粒转染EA.hy926细胞后,Western blot能够在相应位置检测到目的蛋白vIL-6的条带-通过将pSecTag2B-vIL-6瞬时转染EA.hy926细胞或者收集pSecTag2B-vIL-6转染293T细胞后的上清作用于EA.hy926细胞,均观察到细胞增殖和血管生成能力的明显增强-结论:成功构建了重组分泌型质粒pSecTag2B-vIL-6;目的蛋白可在EA.hy926细胞中表达,且vIL-6能够通过自分泌和旁分泌方式促进内皮细胞的增殖和血管生成-