Page 17 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第1期 田 祯，庄皓冉，江楚雯，等. YAP通过调控EEF1A2的表达促进肝癌细胞的迁移和侵袭［J］.
2023年1月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（01）：008-016 · 11 ·

A 10 8 ** B SMMC7721 2.5 ** **
EEF1A2 mRNA相对表达量 6 4 2 EEF1A2 HepG2 Hep3B HCCLM3 SK⁃HEP1 蛋白相对表达量 2.0 ** ** 丌丌丌丌丌丌 ** 丌丌丌丌丌丌 ** 丌丌丌丌丌丌丁丁 丌丌丌丌丌丌 HepG2

SMMC7721
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
70 kDa
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁
YAP
丁丁丁丁丁丁
Hep3B
丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌丁丁
1.5
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁
TAZ
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁丁丁
55 kDa
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌 HCCLM3
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
1.0
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁 SK⁃HEP1
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁丁丁
50 kDa
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
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丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁
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丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁
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丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁
0
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
丌丌丌丌丌丌丁丁
丌丌丌丌丌丌
丁丁丁丁丁丁
丁丁丁丁
丁丁丁丁丁丁
丌丌丌丌丌丌
T N GAPDH 37 kDa 0.5 0 YAP 丁丁丁丁丁丁 TAZ 丌丌丌丌丌丌 EEF1A2
C SMMC7721 SK⁃HEP1 D SMMC7721 SK⁃HEP1
NC1 KD⁃YAP NC2 OE⁃YAP NC1 KD⁃YAP NC2 OE⁃YAP NC1KD⁃EEF1A2NC2OE⁃EEF1A2 NC1KD⁃EEF1A2 NC2OE⁃EEF1A2
YAP 55 kDa EEF1A2 50 kDa
GAPDH 37 kDa GAPDH 37 kDa
5 4 ** ** NC1 6 5 ** ** NC1
YAP蛋白相对表达量 3 2 ** ** NC2 EEF1A2蛋白相对表达量 4 3 2 ** ** NC2
KD⁃EEF1A2
KD⁃YAP
OE⁃EEF1A2
OE⁃YAP
0 1 1 0
SMMC7721 SK⁃HEP1 SMMC7721 SK⁃HEP1
A：TCGA数据库分析EEF1A2 mRNA在肝癌组织以及癌旁组织中的表达，T：肝癌组织（n=369），N：癌旁组织（n=150），两组比较，P < 0.01；
**
B：Western blot检测低迁移能力的HepG2、SMMC7721和Hep3B细胞以及高迁移能力的HCCLM3和SK⁃HEP1细胞中YAP/TAZ和EEF1A2的蛋
白表达，GAPDH为内参，两组比较，P < 0.01，n=3；C、D：Western blot检测干扰或过表达YAP和EEF1A2的SMMC⁃7721和SK⁃HEP1肝癌细胞模
**
型中YAP和EEF1A2表达的鉴定结果，NC1为干扰表达对照组，NC2为过表达对照组，KD⁃YAP为YAP干扰表达组，OE⁃YAP为YAP过表达组，
KD⁃EEF1A2为EEF1A2干扰表达组，OE⁃EEF1A2为EEF1A2过表达组。GAPDH为内参，两组比较，P < 0.01，n=3。
**
图1 EEF1A2和YAP在肝癌细胞系中的表达
Figure 1 Expression of EEF1A2 and YAP in HCC cell lines
如图 1C、D 可见，与干扰对照组（NC1）相比，敲低 1.004 ± 0.117；SK ⁃ HEP1 细 胞 为 0.665 ± 0.153 vs.
YAP（KD⁃YAP）和 EEF1A2（KD⁃EEF1A2）均显著降 1.003 ± 0.094 和 0.637 ± 0.147 vs. 1.007 ± 0.125。干
低 SMMC ⁃ 7721 细 胞 和 SK ⁃ HEP1 细 胞 中 YAP 和 扰EEF1A2表达细胞与各自对照组迁移和侵袭的相
EEF1A2 表达；与过表达对照组（NC2）相比，过表达 对细胞比例：SMMC7721 细胞为 0.563 ± 0.131 vs.
YAP（OE⁃YAP）和 EEF1A2（OE⁃EEF1A2）均显著上 1.006 ± 0.088 和 0.561 ± 0.102 vs. 1.004 ± 0.065；
调细胞中 YAP 和 EEF1A2 表达。该结果表明，本研 SK⁃HEP1 细胞为 0.549 ± 0.132 vs. 1.002 ± 0.117 和
究成功建立了YAP和EEF1A2干扰和过表达的肝癌 0.479 ± 0.162 vs. 1.001 ± 0.127；P < 0.05）。该结果
细胞模型，可用于后续实验研究。 表明，YAP 和 EEF1A2 在肝癌细胞迁移和侵袭过程
基于YAP和EEF1A2在肝癌中高表达 ［5-9］ ，本研 中发挥重要调控作用。
究进一步利用 Transwell 细胞迁移和侵袭实验观察 2.2 YAP 对肝癌细胞中 EEF1A2 及 EMT 相关基因
干 扰 YAP 和 EEF1A2 表 达 对 低 迁 移 能 力 的 表达的影响
SMMC7721细胞和高迁移能力的SK⁃HEP1细胞迁移 本课题组前期建立了Hippo通路下游效应分子
和侵袭的影响。结果显示，与各自对照组细胞相 YAP 和 TAZ 干扰表达的 SMMC7721 细胞模型，并通
比，干扰 YAP 表达和干扰 EEF1A2 表达均可以显著 过 RNA 测序（RNA⁃sequencing，RNA⁃seq）对干扰
抑制 SMMC7721 细胞和 SK⁃HEP1 细胞的迁移和侵 YAP、TAZ 和空载对照的 SMMC7721 细胞进行了转
袭（图 2A、B，YAP 干扰表达细胞与各自对照组迁 录组分析 ［11］ 。本研究进而对干扰 YAP 和 TAZ 所得
移 和 侵 袭 的 相 对 细 胞 比 例 ：SMMC7721 细 胞 为 的差异表达基因取交集，发现有432个重叠基因（图
0.663 ± 0.110 vs. 1.002 ± 0.067 和 0.603 ± 0.156 vs. 3A）；基因功能富集分析显示，这些重叠基因参与调