Page 56 - 南京医科大学自然版

第44卷第11期
·1522 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年11月

A 5 B 4
3 讨 论
*** *** **
4 结核病是除新冠肺炎外全球第一大因单一病原
3
感染导致的致死性传染病 。目前，BCG的预防效果
［11］
3
lg CFU lg CFU 2 不佳，且多耐药菌株及泛耐药菌株的流行进一步加剧
2 了结核病的防治形势。因此，迫切需要深入研究
1 M. tb的关键致病机制以开发新型疫苗与药物。大量
1
研究表明，M. tb的RD区含有众多毒力因子及特异性
0 0 抗原，在结核病的发生发展中发挥重要作用 ［12-16］ 。
H37RvΔRv2647
H37RvΔRv2647： ： Rv2647
H37Rv Ms Ms：：Rv2647 阅读框（Rv2645⁃Rv2660c）。研究显示，该区Rv2645
Rv2647 基因位于 RD13 区，该区域共包含 16 个

IFN⁃γ应答，与 BCG 联合可显著增强免疫保护效
A：C57BL/6 mice were intratracheally infected with the H37Rv， 基因编码的假想蛋白，可诱导强烈的抗M. tb特异性
H37RvΔRv2647，and H37RvΔRv2647：：Rv2647（2×10 CFU/mouse）， ［17］
6
应 ；另有研究发现，Rv2654c 和 Rv2659c 分别编码
and CFU in lung of model mice in each group were evaluated on day 30
噬菌体蛋白和噬菌体整合酶，可诱导结核病特异
（n=6）. B：C57BL/6 mice were intratracheally infected with Ms and
性的 T 细胞应答，显著提高结核病诊断的特异性和
7
Ms：：Rv2647（1×10 CFU/mouse），and CFU in lung of model mice in
**
***
each group were evaluated on day 7（n=6）. P < 0.01， P < 0.001. 敏感性 ［18-19］ ；此外，Rv2660c编码的相关蛋白，在M. tb
图8 模型鼠肺组织细菌负荷 潜伏感染状态下表达显著上调，可通过 TLR2 介导
Figure 8 Lung bacterial load of model mice TNF⁃α、IFN⁃γ等炎症因子的分泌，利于 M. tb 潜伏感
染 ［20］ 。Rv2647 基因编码蛋白在 M. tb 感染及致病中
胞浸润，炎症面积［H37Rv：（62.76 ± 14.24）%，P < 的作用尚不清楚。
0.001；H37RvΔRv2 647：：Rv2 647：（67.37±0.45）%， 基因编辑技术是研究 M. tb 基因功能的有效手
P < 0.001］均显著高于H37RvΔRv2647组（图9）。同 段。目前，应用于M. tb的基因敲除技术主要有依赖
样地，Ms 组模型鼠肺组织结构较完整，肺泡腔结构 于同源重组的基因敲除技术和不依赖于同源重组
相对清晰，炎症面积为（5.71±1.29）%；Ms：：Rv2647 的基因沉默技术。其中，噬菌体介导的同源重组技
组模型鼠肺组织结构破坏明显，肺泡间隔破坏，炎 术可显著提高转染效率及同源重组效率而被广泛
症面积为（33.13±13.84）%（P < 0.05，图10）。 应用。本研究采用具有高 DNA 传递效率的含温敏

A B
Control H37Rv
100
*** ***
80
（%） 60
Lung injury 40

H37RvΔRv2647 H37RvΔRv2647：：Rv2647
20

0
H37Rv
H37RvΔRv2647
H37RvΔRv2647： ： Rv2647

A：The HE staining of lung tissues were observed under microscope 30 days after tracheal infection with the H37Rv，H37RvΔRv2647，and
6
H37RvΔRv2647：：Rv2647（2×10 CFU/mouse）in C57BL/6 mice（scale bar=100 μm）.B：Comparison of lung tissue inflammation area（%）30 days after
***
6
tracheal infection with the H37Rv，H37RvΔRv2647，and H37RvΔRv2647：：Rv2647（2×10 CFU/mouse）in C57BL/6 mice. P < 0.001（n=3）.
图9 感染M. tb后模型鼠肺组织损伤
Figure 9 Lung injury of model mice infected with M. tb