Abstract:目的:应用腺病毒载体AdEasy系统构建携带反义多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)的重组腺病毒载体.方法:将MRP基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183体内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带反义MRP的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASmrp.结果:成功地构建了携带反义MRP的重组腺病毒载体系统,经测定病毒滴度可达2.5×109efu/ml,感染复数(multiplicity of infection,MOI)为100时对SMMC7721/ADM细胞株转导效率可达90％以上.结论:腺病毒载体AdEasy系统能简便、有效地产生重组腺病毒,且生成的病毒滴度高、转导效率好,为进一步研究肝癌耐药机制及其逆转方式提供实验基础.

Abstract:目的:通过构建稳定高表达抑癌基因p16的人胆管癌细胞模型,研究p16对胆管癌细胞增殖的影响及其相关机制.方法:将抑癌基因p16的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中的EcoR I/XbaI位点,构建成p16真核表达质粒pcDNA3p16;通过脂质体法将pcDNA3p16质粒转染人胆管癌细胞系QBC939,经G-418筛选,获得稳定高表达p16的人胆管癌细胞模型.用MTT法测定细胞生长曲线,并测定细胞克隆形成能力,用流式细胞光度术测定细胞周期.用Western分子杂交分析癌基因c-myc的蛋白表达水平.结果:与对照组相比,p16高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到明显抑制;流式细胞光度术表明p16的高表达导致了较为明显的G1期阻滞作用,但对细胞周期的其他时相并无影响;Western免疫印迹分析结果表明癌基因c-myc的蛋白水平表达下降.结论:抑癌基因p16下调癌基因c-myc的表达是p16抑制细胞增殖的分子机制之一.

Abstract:目的:探讨胰腺癌中Plk1、MUC4表达的意义.方法:应用免疫组化EnVision两步法检测33例胰腺癌及其癌旁组织、3例胰腺浆液性囊腺瘤,3例黏液性囊腺瘤,5例慢性胰腺炎中Plk1、MUC4的表达.结果:胰腺癌中Plk1、MUC4的阳性表达率分别为72.7％(24/33)、51.5％(17/33),与胰腺癌患者的年龄、性别、临床分期、组织学分级、淋巴结的浸润、肿瘤的部位无显著相关(P＞0.05).癌旁组织、慢性胰腺炎和良性胰腺肿瘤组织中Plk1、MUC4表达均为阴性.结论:Plk1、MUC4在胰腺癌中表达具有一定肿瘤特异性,可能是胰腺癌治疗的两个理想靶目标.

Abstract:目的:研究表皮生长因子(EGF)在体外和裸鼠模型体内促进雌激素受体(ER)阴性乳腺癌细胞株增殖作用,以及应用蛋白激酶C(PKC)抑制剂Go6976对该作用的影响.方法:以流式细胞技术研究EGF和Go6976对ER阴性乳腺癌细胞株细胞周期的影响,连续观察二者干预下的裸鼠乳腺癌模型的种植瘤生长情况7周.结果:流式细胞检测显示EGF组与对照组相比G2/M和S期细胞百分比增加,增殖指数(PI)达到0.31,EGF有促进肿瘤细胞增殖作用,EGF+Go6976组G0/G1期细胞占91.54％,PI为0.09(P＜0.01),显示Go6976有抑制EGF的促增殖作用.对裸鼠种植瘤的生长观测显示EGF组肿瘤体积增长最快,而Go6976组肿瘤体积增长最慢.在肿瘤重量观察中,EGF组肿瘤较对照组增加约78％(P＜0.01),显示EGF可以促进ER阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-435S在裸鼠体内生长,而Go6976+EGF组与EGF组比较,种植瘤重量减少(P＜0.01),显示Go6976可以抑制EGF的促肿瘤增殖作用.结论:EGF家族的生长信号无论在体外试验还是在裸鼠模型体内实验中都显示有促进ER阴性乳腺癌细胞的增殖的作用.PKC作为EGF家族信号传递过程的重要参与者,抑制其活性可以对EGF信号起到反向调节作用.

Abstract:目的:探讨新辅助化疗对乳腺癌激素受体表达强度和表达状态的影响.方法:检测新辅助化疗组和对照组(未新辅助化疗)的乳腺癌患者化疗前或术前空芯针穿刺标本和最后手术切除的肿瘤组织雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达情况,并比较两组手术前后ER和PR表达变化的差异.结果:新辅助化疗组60例,ER、PR表达强度发生改变分别为18.3％(11/60)和13.3％(8/60),ER、PR状态发生改变分别为6.7％(4/60)和3.3％(2/60);对照组60例,ER、PR表达强度发生改变分别为15％(9/60)和10％(6/60),ER、PR状态发生改变分别为5.0％(3/60)和3.3％(2/60),两组ER、PR表达强度及表达状态均有改变,但差异无显著性(P＞0.05).结论:新辅助化疗对乳腺癌患者的ER、PR表达强度和表达状态的改变无明显影响.

Abstract:目的:探讨用无内固定物的半腱肌腱股薄肌腱重建前交叉韧带的临床运用和效果.方法:南京医科大学第一附属医院自2002年12月至2004年6月对33例前交叉韧带损伤的患者进行了无内固定物的半腱肌腱股薄肌腱重建前交叉韧带术,其中13例移植肌腱采用二股半腱肌腱和二股股薄肌腱,另20例仅为二股半腱肌腱,术前和术后进行Lachman试验评估膝关节的稳定性,用Lysholm评分方法评定膝关节功能.结果:术前Lachman试验均为阳性,术后29例为阴性,4例为阳性.术前Lysholm评分为36～57分,术后Lysholm评分为71～96分.结论:无内固定物的半腱肌腱股薄肌腱重建前交叉韧带为生物固定,固定可靠,费用少,短期效果好,中长期效果有待观察.

Abstract:目的:对治疗股骨髁部不稳定骨折常用的4种内固定方式进行生物力学评价,为临床治疗提供理论依据.方法:采集24根尸体股骨,模拟股骨髁T形骨折,分组用股骨逆行交锁髓内钉、股骨髁解剖钢板(远端为3孔)、动力髁螺钉和95°角钢板固定,进行轴向压缩试验和轴向扭转试验,测量标本的应变、纵向压缩位移、水平分离位移和扭转角度.结果:发现在同等载荷条件下,中心型逆行交锁髓内钉的强度和刚度优于侧方钢板螺钉系统(P＜0.01);动力髁螺钉和逆行交锁髓内钉的抗扭强度和刚度优于95°角钢板和股骨髁解剖钢板(P＜0.01).从应力遮挡实验来看,逆行交锁髓内钉和动力髁螺钉的应力遮挡率大.结论:采用逆行交锁髓内钉和动力髁螺钉固定股骨髁T形骨折,具有良好的生物力学性能,但应注意它的应力遮挡效应,骨折愈合后及时取出内固定.

Abstract:目的:探讨局部应用丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)预防椎板切除术后硬膜外粘连的效果.方法:手术切除12只SD大鼠第一腰椎椎板,造成0.2 cm×0.5 cm硬脊膜裸露区,随机分为2组,每组6只.实验组以棉片浸透0.1 mg/ml MMC,对照组以棉片浸透生理盐水置于裸露的硬脊膜后5 min.术后第4周处死动物,测定其硬膜外组织中胶原组织面积及成纤维细胞记数,同时根据Rydell分级标准评价粘连程度.结果:实验组无明显硬膜外粘连,对照组形成致密的硬膜外粘连.实验组胶原面积及成纤维细胞记数较对照组明显降低.结论:局部应用MMC可有效预防椎板切除术后硬膜外粘连的形成.

Abstract:目的:建立一种方便、实用的慢性器官移植排斥反应模型,为研究器官移植后慢性排斥反应的发病机制、预防和治疗提供平台.方法:以近交系F344大鼠和近交系Lewis大鼠作为供、受体,取供体的双肾作为供肾,借助静脉支架管,行供体的静脉与受体肾静脉的端端吻合,肾动脉与腹主动脉行端侧吻合.施行原位异体肾移植.移植后即给与环孢素腹腔注射.并于术后4周后行病理检查.结果:所有手术均于60 min内完成.所有的受体均存活超过60天,围手术期死亡数为零.受体无急性排斥反应发生.4周后可见典型的慢性排斥反应发生.结论:建立了大鼠慢性排斥反应肾移植模型.为研究慢性排斥反应的发生、进展和干预治疗提供了良好的平台.

Abstract:目的:探讨冷冻精液行供精宫颈内人工授精(ICI)的治疗周期,评价人类精子库冷冻精液的质量.方法:回顾性分析本院生殖中心AID室自2002年7月～2004年3月用冷冻精液对有适应证的641例妇女行供精ICI 1 263周期的临床资料.结果:641例行供精人工授精1 263个周期中共有201例获临床妊娠,截稿时已有39例分娩正常婴儿,周期妊娠率15.91％,受孕率31.35％,其中自然流产18例(8.96％),畸形引产3例(1.49％).妊娠201例中3周期累计妊娠率98.5％(198/201).结论:现行人类精子库的冷冻精液各项指标均达到并超过部颁标准,可用作供精ICI,建议ICI治疗周期3个.

Abstract:目的:观察蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管平滑肌细胞内肌动蛋白(α-actin)mRNA水平表达的动态变化规律,探讨收缩蛋白mRNA表达改变在脑血管痉挛(CVS)中的作用,阐明脑血管痉挛发生的分子机制.方法:采用二次注血法建立蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的兔动物模型,用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测α-actin mRNA表达变化.结果:在SHA后第1天α-actin mRNA表达,与对照组相比,有明显上升(P＜0.01);第4天α-actin mRNA表达,与对照组相比,有明显上升(P＜0.001);第7天α-actin mRNA表达,与对照组相比,无明显差异性(P＞0.05);第14天α-actin mRNA表达,与对照组相比,有明显下降(P＜0.001).结论:SAH后早期α-actin mRNA水平表达上升,能够导致平滑肌收缩蛋白合成上升,增强平滑肌细胞的收缩能力,与CVS的发生、发展有关.持续性CVS后期平滑肌细胞的代谢功能受损,导致α-actin mRNA表达下降.

Abstract:目的:探讨经静脉心肌声学造影(MCE)对慢性心肌缺血心肌血流灌注的诊断价值.方法:建立慢性心肌缺血猪模型,经外周静脉持续滴注微泡造影剂,分别于造模前、造模4周后测算A·β、标化A·β,比较造模前后心肌灌注图像及A·β、标化A·β.结果:造模前声学微泡在心肌组织中均匀分布,色泽明亮,A·β、标化A·β分别为49.82±14.07、1.01±0.21;Ameroid环套扎LCX后4周,局部心肌基本无灌注,回声低暗,A·β、标化A·β分别为4.08±3.56、0.13±0.07,明显低于造模前.结论:心肌声学造影可用于量化评估慢性心肌缺血时的心肌血流灌注状态.

Abstract:目的:探讨特殊类型动脉导管未闭(patent ductus arteriosus,PDA)介入治疗的方法.方法:应用蘑菇伞封堵器(patent ductus arteriosus occluder,PDAO)介入封堵特殊类型的PDA 30例.结果:30例中巨大PDA 5例[最窄径平均12.4±1.7 mm (10.1～16.3 mm)],细小PDA 15例(最窄径平均2.10±0.42 mm),外科手术后再通的PDA 6例(最窄径平均3.20±0.34 mm),伴重度肺动脉压增高的PDA 3例[(平均肺动脉压88±7 mmHg(75～97 mmHg)],合并严重脊柱侧弯畸形1例.对5种不同类型的PDA根据其不同特点,采取不同的方法均成功封堵.结论:对于特殊类型动脉导管未闭选择恰当的方法可成功封堵.

Abstract:目的:探讨房间隔缺损(ASD)患者心房肌组织中WNT4基因的表达变化,分析WNT4基因与ASD病理生理学之间的关系.方法:获取20例单纯Ⅱ孔型ASD患者和9例正常对照右房心耳肌组织标本,采用RT-PCR技术检测心房肌组织中WNT4基因mRNA的表达丰度.结果:WNT4基因表达于正常和ASD患者心房肌组织中,正常心肌组织中的表达丰度为(54.67±25.85)％,ASD患者心肌组织中的表达丰度为(33.21±20.37)％,ASD患者心肌组织中WNT4基因的表达丰度显著低于正常对照(t=2.4151,P＜0.05).结论:WNT4基因在心肌组织中的异常表达可能与ASD的病理生理学有关,其在ASD患者心肌组织中表达下调可能与ASD病理状态下右房压力负荷增加导致胎儿心脏基因程序启动、心脏特异性染色体重构机制有关.

Abstract:目的:用血压正常高值男性作为观察对象,探讨血压正常高值时血压升高在亚临床动脉粥样硬化、脂蛋白的氧化和心脏重塑几方面的早期影响.方法:健康男性(年龄46±5岁)分成两组,血压正常高值组(收缩压130～140 mmHg或舒张压85～89 mmHg,n=32例)和正常血压组(＜130/85 mmHg,n=36例).用检测低密度脂蛋白(LDL)胆固醇内共轭双稀来测量体内氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平.结果:与正常血压组比较,血压正常高值组的颈动脉内膜中膜厚度(IMT)增厚(0.58±0.06)vs (0.75±0.07)mm,P＜0.001,肱动脉内膜中膜厚度(IMT)增厚(0.45±0.05)vs(0.57±0.07)mm,P＜0.001,ox-LDL水平增高(29±9)vs(47±17)mol/L,P＜0.001,但内皮功能和左心室重量两组无差异.经相关性分析,颈动脉IMT与24 h收缩压(P＜0.001)及ox-LDL(P=0.002)相关.结论:血压正常高值者的IMT增厚,ox-LDL增高;血压正常高值男性的IMT增厚与ox-LDL水平升高相关.

Abstract:目的:探讨P波离散度(Pd)和血浆脑钠肽水平(BNP)预测老年高血压病患者伴发的阵发性心房颤动的发生.方法:观察34例有阵发性心房颤动的老年高血压病患者(A组,平均年龄70岁)的血浆BNP水平、最大P波时限(Pmax)、最小P波时限(Pmin)、Pd、左房内径(LAD)和左室射血分数(LVEF),并与34例无阵发性心房颤动病史的高血压病患者(B组,平均年龄71岁)比较.结果:血浆BNP水平:A组显著高于B组,(63.75±54.29)ng/L比(32.72±23.37)ng/L,P＜0.01;Pd:A组显著高于B组,(69.72±25.04)ms比(28.22±14.15)ms,P＜0.001;Pmax A组显著高于B组,(140.02±20.15)ms比(110.35±18.83)ms,P＜0.001;LvEF:A组显著低于B组,(61.84±9.01)％比(67.72±5.18)％,P＜0.05;Pmin、LAD两组差别无统计学差异.结论:血浆BNP水平和Pd均能预测老年高血压病患者伴发的阵发性心房颤动的发生.

Abstract:目的:比较13C-辛酸呼气试验(OBT)与胃排空功能超声检测(GEU)在糖尿病患者胃排空功能检测中的一致性.方法:2型糖尿病患者71例,对照组30例,分别行OBT与GEU检测,评价胃排空功能,并分别比较两种检测手段所得参数的相关性.结果:OBT显示糖尿病组胃半排空时间(GET1/2)、延迟相时间(tlag)均明显延长,120min胃残留率(Ret120min)增加.GEU亦显示不同时点糖尿病组胃排空率延迟.两种方法在不同时间点胃排空率具有高度相关性,对照组:60 min r=0.501P=0.005,120min r=0.526 P=0.002;糖尿病组:60 min r=0.604 P＜0.001,120 min r=0.651 P＜0.001.结论:应用OBT方法检测糖尿病胃动力障碍与GEU所得结果一致性较好,OBT不失为一种相对理想和临床实用的检测方法.

Abstract:目的:研究心脏术后早期混合静脉血氧饱和度(S(-v)O2)水平与术后并发症的关系.方法:95例心脏瓣膜置换术和冠状动脉旁路移植术术后患者.人ICU30 min后在安静状态下记录S(-v)O2值,以后每小时记录1次,共12 h.按S(-v)O2均数分为≤65％(Ⅰ组,n=36)、＞65％(Ⅱ组,n=59)两组.统计各组患者的ICU停留时间、在院期间并发症发生数.结果:Ⅰ组术后低心排的发生率为50％(18/36),心律失常发生率为25％(9/36),低氧血症发生率为14％(5/36)均较高,和Ⅱ组间有显著差异,P值＜0.05.两组间其他并发症的发生率无显著性差异.Ⅰ组的ICU停留时间(4.42±3.41)天较Ⅱ组(3.00±1.56)天明显延长,P＜0.05.结论:心脏术后早期S(-v)O2水平可影响术后并发症的发生.低S(-v)O2水平时循环和呼吸系统并发症增多,ICU停留时间延长.

Abstract:目的:探讨胸段食管癌根治术后纵隔转移灶后程加速超分割三维适形放射治疗的意义和效果.方法:104例食管癌根治术后发生纵隔转移患者,随机分为常规治疗组和研究组.开始治疗时两组均采用前后两野同照放射治疗,分割剂量DT2.0 Gy/次,5次/周,照射38 Gy后常规组根据C T复查情况重新模拟机定位,两野或者三野避脊髓继续常规分割治疗.研究组行CTsim定位,进行三维适形计划设计,新计划以DT1.5 Gy/次,2次/d,5天/周,常规组照射目标剂量60 Gy,研究组照射目标剂量68Gy.结果:治疗后3个月复查CT,各组病灶达CR者14//29例,分别占26.9％和55.8％,各组病灶达PR者26/22例,分别占50.0％和42.3％,两组总的有效率(CR+PR)分别是76.9％和98.1％.结论:食管癌根治术后纵隔转移患者进行后程加速超分割三维适形放射治疗可以明显提高局部控制率,疗效达CR和CR+PR的患者均有统计学差异(P≤0.005和P≤0.05),急性放射治疗反应可耐受,具有良好的应用前景.

Abstract:目的:探讨急性缺血性卒中(AIS)患者外周血中性粒细胞(PMN)和单核细胞(MNL)表面黏附分子整合素CD11c/CD18表达的变化及意义.方法:采用流式细胞术,单克隆抗体标记测定28例AIS患者发病72 h内及7天时外周血表面PMN、MNL表面黏附分子CD11c/CD18的表达量.同时测试28例健康者作对照.结果:发病72 h内患者组PMN、MNL表面黏附分子CD11c/CD18的表达显著高于对照组(P＜0.01);发病7天后患者组CD11c/CD18的表达有所下降,与72 h内检测结果相比差异无统计学意义(P＞0.05);但仍显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:AIS时激活的PMN、MNL上整合素CD11c/CD18表达上调,可能参与了AIS的炎症反应机制.

Abstract:目的:通过检测川崎病患儿静脉输注丙球治疗前后外周血T细胞表面CD40L(CD154)表达,探讨川崎病冠状动脉损伤的发病机制.方法:采用流式细胞仪检测26例川崎病患儿静脉输注丙球治疗前后、16例其他发热性疾病患儿、15例正常儿童外周血T细胞表面的CD40L表达.采用酶联免疫吸附试验检测相应血清中可溶性CD40L.结果:川崎病患儿CD4+T细胞表面CD40L表达(66.26±6.71)％显著高于其他发热性疾病对照组(58.11±6.35)％及正常儿童对照组(46.96±4.27)％,川崎病患儿静脉输注丙球治疗后明显下降(58.86±7.49)％.川崎病患儿血清中可溶性CD40L(17.36±5.72)ng/ml亦显著高于其他发热性疾病对照组(12.17±4.28)ng/ml及正常儿童对照组(7.48±3.59)ng/ml,静脉输注丙球治疗后无明显下降(16.46±5.12)ng/ml.CD4+T细胞表面CD40L表达与川崎病冠状动脉损伤有关,而CD8+T细胞表面CD40L的表达及可溶性CD40L与冠状动脉损伤无关.川崎病患儿CD4+T细胞表面CD40L表达与C反应蛋白(CRP)水平正相关(r=0.553,P＜0.05).结论:CD40L异常表达在川崎病发病机制中其起重要作用.静脉输注丙球能下调CD40L表达,且有利于治疗血管炎.

Abstract:目的:观察江苏宜兴地区中小学生的常年性变应原致敏状况.方法:2002～2003年以宜兴市丁山镇930名中小学生(6～16岁)为对象进行室尘和尘螨变应原皮肤划痕试验.结果:室尘和尘螨变应原的皮试阳性率分别为13.1％和10.0％,总阳性率为17.5％.Cochran Armitage趋势分析表明,变应原致敏率随年龄增长而上升(P＜0.005);小学一、四年级与初中一年级各组间变应原致敏率无统计学差异,而高中一年级学生的致敏率明显高于其他各年级组(P＜0.005).结论:宜兴地区中小学生对常年性变应原的致敏随年龄呈增加趋势,尤以高中学生的致敏率上升为著,应加强环境干预.