Abstract:目的:观察甘氨酸(Gly)对ATP耗竭的犬近曲小管上皮细胞(MDCK细胞)的保护作用,探讨其对复能时细胞损伤、增殖及代谢情况的影响.方法:通过正置显微镜观察、四甲基噻唑蓝(MTT)实验、3H-TdR掺入实验、乳酸脱氢酶(LDH)释放、台盼蓝活细胞计数,观察ATP耗竭时加入Gly对MDCK细胞的保护作用,及其后细胞复能时对细胞损伤、增殖及代谢情况的影响.结果:ATP耗竭2 h后,Gly处理组细胞台盼蓝染色率较耗竭组降低约50％,LDH释放率明显减少,而3H-TdR掺入量为耗竭组细胞的3倍以上.复能不同时相,光镜下Gly处理组细胞损伤程度明显减轻,台盼蓝染色率及LDH释放率均显著低于耗竭组,而MTT D值和3H-TdR掺入量明显高于耗竭组.结论:甘氨酸对ATP耗竭的MDCK细胞具有保护作用,可增加复能后细胞存活的机会,防止细胞膜通透性增加,提高受损细胞的增殖活性和代谢潜能.

Abstract:目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能.方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS-ANG-EGFP.该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用金属螯合亲和层析纯化目的蛋白.激光共聚焦显微镜和Westernblot鉴定融合蛋白的表达情况.结果:重组蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并从破菌上清中一步纯化目的蛋白,纯度可达95％以上.Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原性和特异性.诱导表达的菌体在激光共聚焦显微镜下可发射明亮的绿色荧光.结论:成功的表达并纯化了ANG-EGFP融合蛋白,利用EGFP的荧光示踪作用,该融合蛋白可用于血管生成素核转位和胞内共定位蛋白质研究.

Abstract:目的:通过检测HOXB4基因表达,评价体外扩增的脐带血干细胞(CBSC)自我更新的能力.方法:CBSC在含造血细胞因子(TPO+SCF+FL+G-CSF)的无血清培养基体外扩增7天和14天,抽提细胞总RNA,采用定量PCR检测HOXB4基因的表达.结果:CBSC体外培养后,细胞总数可以增加近100倍,但HOXB4的表达较扩增前下降.培养7天HOXB4的水平为扩增前 的18％,培养14天,HOXB4表达仅为扩增前的3％左右.结论:CBSC体外扩增细胞数量增加的同时,自我更新能力逐渐下降,甚至消失.

Abstract:目的:建立蚊对菊酯类杀虫剂抗性的PCR检测方法.方法:应用荧光半定量RT-PCR,检测经SSH结合cDNA芯片分离鉴定的淡色库蚊对溴氰菊酯抗性相关基因NYD-Tr在抗性品系与敏感品系中的表达水平.结果:经荧光半定量RT-PCR检测,NYD-Tr进入指数期的循环数抗性品系早于敏感品系,抗性品系组比敏感品系组先进入指数增长期.结论:以NYD-Tr作为靶基因,荧光半定量RT-PCR可区分淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系与敏感品系,亦即可检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性.

Abstract:目的:观察迷走神经刺激(VNS)后丘脑室旁核(PV)、下丘脑室旁核(PVN)星形胶质细胞数量和形态的改变,阐明星形胶质细胞在VNS治疗癫癎中的机制.方法:利用免疫组织化学方法,观察VNS前后PV、PVN胶原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化.结果:VNS后,PV、PVN GFAP阳性纤维数量增多,染色加深,部分细胞胞体增大,突起增多,变粗变长.结论:VNS可以改变星形胶质细胞的活性.提示PV、PVN星形胶质细胞形态功能的改变可能在VNS抑制癫癎过程中起了重要作用.

Abstract:目的:为探究国人卵圆孔的准确径值提供依据.方法:观测78例颅骨,156侧(男104侧,女52侧)卵圆孔的形态和径值.结果:国人的卵圆孔可分为5种类型:卵圆形、圆形、梨形、长条形、肾形;长径均值为7.54 mm,宽径均值为3.66 mm.结论:卵圆孔在性别、侧别上存在差异,有显著性意义(P＜0.05).

Abstract:目的:研究在高糖环境下人脐静脉内皮细胞(ECV304)产生一氧化氮(NO)量及其合酶和表达细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)的变化,以及茶多酚(tea polyphenols,TPs)的干预作用.方法:培养ECV304,加入不同培养液,分为正常对照组、高糖组、茶多酚组、茶多酚干预组,以硝酸还原酶法测定培养液中NO的代谢产物NO2/NO3-(NOX-)含量,用分光光度法检测培养液中NOS活性,用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和细胞酶联免疫吸附法(ELISA)观察ICAM-1的基因和细胞表面蛋白的表达.结果:高糖组NO含量、NOS活性、ICAM-1的基因和蛋白表达较正常对照组显著增加,且ICAM-1的蛋白表达呈现一定的时间依赖性;茶多酚干预组显著抑制高糖时NO含量、NOS活性以及ICAM-1的基因和蛋白表达的上调.结论:高糖时内皮细胞NOS的激活、NO的大量释放以及ICAM-1 mRNA和蛋白的表达上调,对糖尿病早期进展起一定作用,茶多酚对这种损伤具有明显的保护作用.

Abstract:目的:研究胰高糖素样肽-1(GLP-1)对大鼠胰岛功能的影响,探讨GLP-1在糖尿病治疗中的作用.方法:①GLP-1(10 nmol/L)与原代培养的大鼠胰岛共孵育1天、3天和5天后,分别行葡萄糖刺激下的胰岛素分泌试验(GSIS),在试验的0、10、20及60 min依次收集细胞培养上清液,放免法检测胰岛素水平的变化.或与GLP-1共育1天、3天、5天后分别收集各组胰岛细胞,RT-PCR法检测各组胰岛素基因表达的变化.②分别予不同浓度的GLP-1(0、1、10、102和103nmol/L)与大鼠胰岛细胞瘤细胞RINm5f共育24h,及GLP-1(10 nmol/L)与RINm5f共育24h、48 h及72 h,MTT法检测各组A值变化.结果:①与GLP-1共育后,大鼠胰岛基础胰岛素分泌量增加(P＜0.05),GSIS试验中各时间点胰岛素分泌量均升高(P＜0.05),胰岛素基因的表达量呈时间依赖性升高,即予GLP-1刺激5天后,胰岛素基因表达量最高;②与GLP-1共育后,随GLP-1浓度的增高及刺激时间的延长,RINm5f细胞MTT法中A值呈剂量及时间依赖性的增加.结论:GLP-1可促进大鼠胰岛细胞胰岛素基因的表达和蛋白的分泌,对大鼠胰岛细胞亦有明显的促增殖作用.

Abstract:目的:构建及鉴定载入金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)的重组腺相关病毒载体.方法:应用基因重组的方法构建含全长TIMP-1的重组腺相关病毒骨架质粒(pAAV-TIMP-1),利用磷酸钙沉淀法将腺相关病毒载体质粒共转染入HEK293细胞中,分别装配成rAAV-TIMP-1和rAAV-hrGFP,将rAAV-hrGFP转导HT1080细胞测定重组病毒的滴度,Western blot方法检测rAAV-TIMP-1在HT1080细胞中的表达情况.结果:成功构建rAAV-TIMP-1,病毒滴度达到109TU/ml,转导细胞后,转导组TIMP-1的表达水平高于对照组.结论:构建的rAAV-TIMP-1,为基因修饰胰岛移植提供了新的手段.

Abstract:目的:观察胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶(ALP)的合成和钙化结节形成的影响.方法:不同浓度IGF-Ⅰ分别刺激培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力;采用对硝基酚磷酸盐法测定细胞裂解液中ALP活性;Von Kossa染色测定钙化结节数目.结果:一定浓度IGF-Ⅰ能明显增加大鼠成骨细胞数量(P＜0.05),在0.1～100.0 ng/ml这种作用与IGF-Ⅰ的浓度呈正相关;经IGF-Ⅰ刺激,大鼠成骨细胞ALP合成明显高于对照组(P＜0.05);经IGF-Ⅰ刺激,大鼠成骨细胞钙化结节数目明显高于对照组(P＜0.001).结论:IGF-Ⅰ能增加体外培养的大鼠成骨细胞数量,促进成骨细胞ALP合成和钙化,提示IGF-Ⅰ可能直接促进骨形成.

Abstract:目的:扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE-A9(melanoma antigen A9)cDNA,构建原核表达载体,制备抗MAGE-A9单抗,观察其在肝细胞癌中的表达.方法:从人肝癌组织提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-A9 cDNA,插入载体pMD18-T中,测序正确后,构建重组表达载体pBAD/gⅢ-MAGE-A9,转化大肠杆菌TOP10株进行表达.重组蛋白经L-Arabinose诱导表达纯化后,制备抗MAGE-A9单抗,免疫组化检测MAGE-A9在肝细胞癌中的表达和定位.结果:获得MAGE-A9cDNA,测序结果与GenBank一致.成功构建表达载体,表达可溶重组蛋白,SDS-PAGE分析其相对分子质量为35kD.获得抗MAGE-A9单抗,MAGE-A9在肝细胞癌中的阳性表达率为21％(8/39),主要表达于胞浆,未见肿瘤异质性,统计学分析MAGE-A9的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性.结论:有相当部分肝癌患者的肿瘤表达MAGE-A9抗原,且其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性,MAGE-A9可能成为肝癌特异性免疫治疗的靶点.

Abstract:目的:构建及表达全人源抗肝癌MAGE-A1单链抗体(A3)与相思子毒素A链(Abrin-A)的原核表达载体,并检测其对人BEL7402肝癌细胞系的杀伤作用.方法:应用PCR方法体外扩增A3基因,经测序后重组入原核表达载体pBAD/gⅢ-AbrinA相应位点上,将构建正确的pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A表达质粒转化E.coli TOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达.表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,采用MTT法检测其对BEL7402细胞的体外杀伤作用.结果:构建的重组免疫毒素表达载体pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约60 kD;纯化的pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A对BEL7402细胞的最大杀伤率为70.17％,IC50为3.12μg/ml.结论:构建、表达的全人源抗肝癌A3/Abrin-A融合免疫毒素对肝癌细胞有较明显的杀伤作用.

Abstract:目的:从全人源单链噬菌体抗体库中筛选出抗MAGE-A1特异性单链抗体并进行免疫活性鉴定.方法:以纯化MAGE-A1为抗原,经过五轮吸附-洗脱-扩增,从单链噬菌体抗体库中筛选出特异性抗MAGE-A1噬菌体抗体,ELISA、Dot Blotting检测其抗原结合能力,并对特异性较强的克隆提取质粒,表达可溶性抗体.Western Blotting、Dot Blotting、免疫细胞化学检测其抗原结合活性,非竞争ELISA法检测其亲和常数.结果:从单链噬菌体抗体库中筛选出噬菌体抗体并进行富集,经鉴定为抗MAGE-A1的特异性噬菌体抗体.抗MAGE-A1可溶性抗体分子量约为30 kD,与MAGE-A1特异性结合,其亲和常数约为1.432×106 L/mol.结论:所得全人源抗MAGE-A1单链抗体保留完整抗体分子结合抗原的特异性,免疫原性弱,是肿瘤导向治疗的理想载体.

Abstract:目的:建立恶性软组织肿瘤动物模型并研究MR成像在软组织肿瘤中的应用价值.方法:15只新西兰大白兔,一侧大腿近段注射VX2肿瘤组织悬液0.1ml,分别于肿瘤组织接种后第7、14、21、28天行MR平扫和增强扫描,观察肿瘤生长情况并测量其体积大小.随后处死模型兔,取出肿瘤测量其体积大小并与MRI测量的肿瘤体积比较;然后将肿瘤组织行病理学检查,观察其组织结构特点及与MR信号之间的关系.结果:所有兔大腿VX2肿瘤的MRI体积测量值近似于实际标本值.结论:MR成像是一种准确且相对简捷的定量、动态评估软组织肿瘤性病变的成像方法.

Abstract:目的:探讨结肠肿瘤中KAI1的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学方法检测109例结肠癌原发病灶、13例肝脏转移灶、46例良性结肠肿瘤和28例正常结肠黏膜中KAI1的表达,并与临床病理资料比较分析.结果:28例正常结肠黏膜均表达KAI1.x2检验表明,随着结肠肿瘤病变的发展,在结肠原发病灶、肝脏转移灶和结肠良性病变中KAI1的表达存在明显差异(P＜0.001).并且在早期结肠癌(Ⅰ/Ⅱ期)与晚期结肠癌(Ⅲ/Ⅳ期)中,KAI1的表达也有明显差异(P＜0.01).结论:在Ⅲ、Ⅳ期以及发生肝脏转移的患者中,KAI1的表达明显下降.结肠癌中KAI1表达与其病变发展呈负相关,KAI1表达的降低可能是结肠癌病人预后不良的标志之一.

Abstract:目的:血管生成是恶性肿瘤形成与发展中的重要事件,缺氧诱导因子1及其调节的VEGF的表达对食管鳞癌的血管生成和临床病理学特征具有重要的意义.该研究旨在研究缺氧诱导因子1α的常见多态性C1772T对食管鳞癌血管生成的影响,并初步探讨其机制.方法:用PCR-RFLP法研究95例食管鳞癌、104例正常对照的缺氧诱导因子1α的常见多态性C1772T的基因型(突变者经直接测序确认);免疫组化法测定不同基因型肿瘤组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、内皮源性生长因子VEGF、微血管密度MVD;比较不同基因型肿瘤的HIF-1α、VEGF、CD34(用以标记MVD)的表达差异.结果:在病例和对照中,只发现C/C和C/Y两种基因型,食管鳞癌组C1772T的突变率为11.58％(11/95),正常对照组为10.58％(11/104),两组相比没有统计学差异;C/T组和C/C组肿瘤组织相比,HIF-1α表达无差异,VEGF的表达上调,MVD明显增加.结论:HIF-1α基因单核苷酸多态性C1772T与食管鳞癌的VEGF高表达和增强的血管生成有关.

Abstract:目的:提高对脾肿瘤这一少见病的认识,减少对其误诊、误治.方法:结合9例脾肿瘤病历并复习文献对其诊断、鉴别诊断、病理类型和治疗进行讨论.结果:9例中良性肿瘤6例,恶性肿瘤3例,均行手术治疗.8例行脾脏切除,1例因广泛转移仅行淋巴结切除送病检.结论:脾肿瘤的病史和体征无诊断特异性,影像学检查和细针穿刺细胞学检查是其术前明确诊断的重要手段.

Abstract:目的:观察吉西他滨联合顺铂(GP方案)治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效和不良反应.方法:吉西他滨1000～1250 mg/m2,30 min内滴完,第1、8天给药,顺铂70 mg/m2,静滴,第8天吉西他滨后给药,21天为1周期.分别化疗2～6周期后按WHO标准评价疗效和不良反应.结果:入组30例均可评价疗效,部分缓解(PR)13例,稳定(SD)14例,进展(PD)3例,近期有效率43.3％,中位疾病进展时间(TTP)为6.2个月.1年生存率60.0％,中位生存期(MST)13.5个月.主要不良反应为骨髓抑制及恶心呕吐.结论:GP方案治疗晚期非小细胞肺癌疗效较好,不良反应轻,多数患者耐受良好,值得推广应用.

Abstract:目的:探讨年轻宫颈癌(≤35岁)的发病趋势、临床病理特征及预后,并与中老年宫颈癌(＞35岁)进行比较.方法:对126例年轻宫颈癌(研究组)以及随机选择的同期200例中老年宫颈癌(对照组)进行回顾性分析,比较两组临床病理特征和5年生存率.结果:年轻宫颈癌新增病例所占比例呈逐年递增趋势,由1997年的7.8％至2002年的10.9％,研究组以接触性阴道出血为主要症状,占57.1％(72/126),对照组仅18.5％(37/200)(P＜0.01),腺癌所占比例研究组为21.4％(27/126),对照组为12％(24/200)(P＜0.05);盆腔淋巴结转移率两组分别为31.7％(13/41)、11.3％(7/62)(P＜0.05),卵巢转移率为0,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期5年生存率研究组为75.0％、61.2％、32.7％,对照组为88.1％、81.3％、68.7％,两组对照Ⅰ期无统计学意义而Ⅱ、Ⅲ期差异显著(P＜0.05).结论:年轻宫颈癌发病呈上升趋势,其原因可能与性传播有关,年轻宫颈鳞癌患者手术时保留卵巢是安全可行的,年轻宫颈癌患者预后差与腺癌比例增高,淋巴结转移率高有关.

Abstract:目的:研究肝脏局灶结节性增生(FNH)的影像表现.方法:回顾性分析了经病理证实的12例14个病灶的FNH的CT和磁共振成像(MRI)表现,并与病理对照,探讨FNH的影像特点.结果:12例14个病灶,CT平扫低密度11个,等密度3个;增强动脉期扫描所有病灶均有明显强化,4个病灶中心见疤痕,门脉期扫描9个病灶为等密度,5个为稍高密度,延迟期1例病灶中心疤痕有延迟强化;有7例FNH行MRI检查,T1WI呈等低信号,T2WI呈等高信号.结论:螺旋CT多期扫描或MRI检查可充分反映FNH的病理特征,具有很高的诊断价值.

Abstract:目的:探讨腰麻阻滞平面与阑尾切除术中牵拉反应的关系.方法:203例腰麻下行阑尾切除术患者,按阻滞平面的不同分为A组:高于T5;B组:等于T5;C组:等于T6;D组:低于T6.牵拉反应分Ⅰ～Ⅲ级,记录每组中牵拉反应情况.结果:A、B、C组中Ⅰ级的发生率明显多于D组(P＜0.01),而A、B组中Ⅰ级的发生率与C组比较均有显著性差异(P＜0.01).A、B两组Ⅰ级的发生率无统计学差异(P＞0.05).结论:在腰麻阻滞平面等于或高于T5时能较好地抑制阑尾切除术中牵拉反应;阑尾、阑尾系膜的感觉纤维是经T5或T6及以下某些节段的脊神经进入脊髓的.

Abstract:目的:采用不同的预测模型拟合江苏省启东市1972～2001年肺癌发病资料,并预测其到2015年的发展趋势,为启东市制订肺癌防制策略提供依据.方法:利用启东市肿瘤登记处积累的1972～2001年肺癌登记资料,采用时间序列分析方法中的趋势外推法、指数平滑法、ARIMA模型(Box-Jenkins法)等,分析该地肺癌发病率的变化趋势.比较各方法预测精度,赋予不同权重,建立组合预测模型.结果:各种分析、预测方法显示:肺癌的发病率呈现上升趋势;保守预测估计至2010年肺癌发病率将突破50/10万,2015年肺癌发病率将达到60/10万,接近周边大城市肺癌发病率水平.其中男性肺癌发病率到2010年接近85/10万,2015年将达到90/10万以上:女性肺癌发病率到2010年接近30/10万,2015年将超过35/10万.到2010年启东市男女肺癌发病率将在2001年基础上分别增长38.85％和25.91％.结论:启东市30年(1972～2001)肺癌发病率呈现持续增长趋势,应对该地居民肺癌发生影响因素及变动情况作进一步的探讨:探索比较了多种预测模型的拟合优度,在此基础上建立组合模型,可以达到综合预测的目的.