Abstract:目的:观察T细胞对大鼠胰岛瘤细胞系RINm5f凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法:应用PI法检测T细胞与RINm5f共培养后RINm5f细胞的凋亡率;应用半定量RT-PCR技术检测培养后bcl-2、bax、p53和fas mRNA的表达.结果:PHA与T细胞均可致胰岛细胞的凋亡,且P、T具有协同效应,P或T或两者联合应用均呈时间依赖性地促进RINm5f细胞的凋亡;胰岛细胞凋亡过程中,P、T可协同致诱导凋亡基因bax、fas mRNA表达水平明显升高,而抗凋亡基因bcl-2及p53mRNA表达水平有下降趋势,但统计学无显著性差异.结论:T细胞可通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重胰岛移植排斥反应,其机制可能与凋亡基因与抗凋亡基因的表达比率变化有关,其中fas、bax诱导凋亡基因可能起主要作用.

Abstract:目的:观察胰岛素每日多点注射(MDI)和持续皮下胰岛素输注(CSⅡ)对初诊断2型糖尿病患者体内C反应蛋白(CRP)和细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的影响.方法:将38名初诊的2型糖尿病患者随机分为两组,分别进行CSⅡ和MDI方案强化治疗1个月,采用酶联免疫法分别测定比较治疗前后两组CRP和ICAM-1水平.结果:初诊的2型糖尿病患者采用CSⅡ和MDI方案强化治疗后,CRP水平均显著降低,由治疗前2 044.82±1 801.93 ng/ml、3 167.73±1 960.00 ng/ml分别下降为1 540.49±1 205.29 ng/ml、2 014.10±1 600.40 ng/ml,但两组间比较无统计学差异;治疗后,两组ICAM-1水平均有下降趋势,但都无统计学意义.结论:初诊断的2型糖尿病患者采用两种强化治疗方案均可在良好控制血糖的同时有效降低CRP水平.

Abstract:目的:探讨罗格列酮对高胰岛素血症大鼠卵巢的影响及作用机制.方法:18只成年雌性SD大鼠随机分成3组:正常对照组、高胰岛素血症组、罗格列酮干预组.建立模型,药物干预后,测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR指数及血睾酮(T)水平,观察卵巢病理变化,并采用免疫组化方法检测卵巢11β-羟基类固醇脱氢酶1型(11β-HSD-1)的表达.结果:(1)与高胰岛素血症组比较,干预组大鼠血FINS显著降低(P＜0.01),T、HOMA-IR指数均下降(P＜0.05).(2)高胰岛素血症组卵巢各级发育卵泡减少,成熟卵泡几乎未见,间质细胞增生.干预组各级发育卵泡增多,间质正常,可见成熟卵泡.(3)免疫组化显示高胰岛素血症组卵巢间质11β-HSD-1表达增高(P＜0.01),干预组表达下降(P＜0.01).结论:罗格列酮可抑制卵巢11β-HSD1表达,解除高胰岛素血症所致的卵泡发育阻滞现象,抑制间质细胞增生,恢复卵巢排卵功能,这些作用可能部分与其改善IR有关.

Abstract:目的:评价联合检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛细胞抗体(ICA)和胰岛素自身抗体(IAA)对1型糖尿病的早期诊断价值.方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测GADA、ICA和IAA;电化学发光法检测患者空腹和餐后2 h血清C肽.结果:1型糖尿病患者GADA、ICA和IAA阳性率明显高于2型患者和正常组,P＜0.001.GADA在1型糖尿病中的阳性检出率明显高于ICA和IAA组,P＜0.01.青少年患者组ICA阳性率高于GADA和IAA组,P＜0.001,成年组及老年组患者中GADA阳性明显高于ICA和IAA组,P＜0.05.GADA/ICA、GADA/IAA及三种抗体联合检测的阳性率,敏感性和诊断符合率均高于单一抗体检测的阳性率,P＜0.05.抗体阳性患者的空腹和餐后C肽水平明显低于抗体阴性患者,P＜0.01.结论:自身抗体阳性患者的胰岛功能明显低于阴性患者,表明抗体阳性患者胰岛功能有明显损伤.GADA、ICA和IAA联合检测可以提高诊断敏感性和诊断符合率,对1型糖尿病早期诊断具有重要价值,且青少年期GADA和ICA的联合检测显得尤为重要.

Abstract:目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Ⅳ型胶原在糖尿病大鼠肾皮质中的表达及罗格列酮干预后的影响.方法:将40只SD大鼠随机分为3组:正常对照组(C组),糖尿病组(DM组),糖尿病罗格列酮干预组(DR组).腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,罗格列酮对DR组进行治疗性灌胃.应用免疫组化法检测各组大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9和Ⅳ型胶原的蛋白表达.分别在光镜、透射电镜下观察各组大鼠肾小球病理改变.结果:DM组MMP-2、MMP-9的表达较C组显著下降,Ⅳ型胶原显著升高(P＜0.01),出现糖尿病肾病(DN)典型的病理改变.DR组MMP-2、MMP-9的表达较DM组增高,Ⅳ型胶原表达下降,有显著统计学差异(P＜0.01)病理改变较DM组明显改善.结论:罗格列酮可通过逆转糖尿病大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9的表达,降低Ⅳ型胶原的堆积,对DN起保护作用.

Abstract:目的:探讨JNK对胰岛素和葡萄糖刺激下脂肪细胞表达脂联素(adiponectin)和抵抗素(resistin)的影响.方法:用不同浓度葡萄糖(5 mmol/L,25 mmol/L)和胰岛素(0.1 nmol/L,100 nmol/L)刺激分化成熟的脂肪细胞,各浓度均设立JNK抑制剂组(SP600125),采用荧光定量PCR检测adiponectin和resistin的mRNA表达.结果:高浓度胰岛素和葡萄糖均能使adiponectin mRNA表达降低(P＜0.01),resistin表达升高(P＜0.01),对应的抑制剂组adiponectin表达较高浓度组增加(P＜0.05),resistin表达降低(P＜0.05);两个低浓度组与对应抑制剂组及对照组相比均无明显差异.结论:高浓度葡萄糖和胰岛素影响了脂肪细胞脂联素和抵抗素的表达,JNK在其中起到了介导作用.

Abstract:目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖及结缔组织生长因子(CTGF)诱导肾小管上皮细胞(HKC)纤维化的影响.方法:体外培养HKC,分别在高糖及CTGF环境下加入不同浓度人重组肝细胞生长因子(rhHGF),以RT-PCR检测转化生长因子β1(TGF-β1)、CTGF、以及纤维化指标Ⅳ型胶原(COL4A1)、纤连蛋白(FN)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等的基因表达.结果:高糖及CTGF刺激下,细胞因子和纤维化指标表达均不同程度增加,其中,CTGF作用下,COL4A1表达明显低于高糖组(P＜0.01).高糖及CTGF环境下加入rhHGF后,纤维化指标显著降低(P＜0.01),其中高糖+rhHGF组,CTGF表达减少,TGF-β1表达无明显改变(P＞0.05).结论:HGF可通过抑制TGF-β下游因子CTGF的表达,发挥抗肾小管上皮细胞纤维化作用,但CTGF并不是其惟一的阻断途径.

Abstract:目的:研究中国江苏人群JWA基因单核苷酸多态性(SNPs)与消化道肿瘤易感性的关系.方法:采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法对年龄、性别相匹配的202例消化道肿瘤患者和215例健康人群的外周血淋巴细胞基因组DNA标本检测了JWA启动子-76G/C和外显子3区723T/G SNPs的频率和分布,用DNA直接测序法证实SNPs变异.分析探讨JWA基因多态性和消化道肿瘤易感性的关系.结果:-76G/C多态性在消化道病例中的频率(19.3％)显著高于对照(10.7％).-76G/C变异时罹患消化道肿瘤的危险性是正常时的1.99倍(调整的比值比:1.99;95％可信区间:1.14～3.48).存在上述变异位点的男性患者患消化道肿瘤的危险性增加,而与性别及饮酒的关系不明显.723T/G多态性频率在消化道肿瘤患者和对照人群中的分布无显著差异.结论:在中国江苏汉族人群中,JWA基因5'侧翼区的多态位点-76G/C变异显著增加江苏汉族人群患消化道肿瘤的危险性,外显子3区多态723T/G则无显著性差异.

Abstract:目的:采用载体构建及荧光定量PCR的方法比较BCL2等位基因不同部位PCR引物在定量分析中的扩增效率,判断其用于不同等位基因转录活性分析的可靠性.方法:用PCR扩增包含定量PCR目的片段的序列,然后将扩增产物分别插入pGEM-T Easy载体中,构建TA3重组载体,再以TA3载体为模板,采用荧光定量PCR方法比较引物对之间扩增效率.结果:定量PCR结果显示引物对之间扩增效率无明显差异.结论:所检测的PCR引物对之间的扩增效率一致,可用于比较分析mbr+/mbr-Nalm-6杂合子细胞系中两个等位基因表达活性.

Abstract:目的:探讨大鼠臂旁核(PBN)内一氧化氮合酶(NOS)是否参与内脏伤害性刺激的传导过程.方法:给予大鼠2％福尔马林溶液灌胃后,用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学结合Fos蛋白免疫组织化学的方法,观察Fos阳性神经元和NADPH-d阳性神经元及阳性纤维在PBN各亚核内的分布及共存情况.结果:PBN内Fos阳性神经元与NADPH-d阳性产物的分布范围部分重叠:在臂旁外侧核背亚核内,Fos阳性神经元与NADPH-d阳性神经元相互邻接,并可见部分Fos/NADPH-d双标神经元;在臂旁外侧核外亚核内,Fos阳性神经元与NADPH-d阳性纤维终末相互混杂分布.结论:大鼠PBN内NOS可能以不同的方式参与了内脏伤害性刺激的传导过程.

Abstract:目的:探讨变应性鼻炎大鼠翼腭神经节中血管活性肠肽(VIP)的变化情况.方法:用SABC免疫组织化学的方法观察在变应性鼻炎大鼠和对照组大鼠翼腭神经节神经元中VIP表达的差异.结果:变应性鼻炎大鼠翼腭神经节内VIP神经元表达较正常明显增加.结论:翼腭神经节内VIP神经元可能参与变应性鼻炎的发病.

Abstract:目的:探讨内毒素休克早期猕猴肾脏的损伤.方法:11只猕猴随机分成2组:对照组5只,静脉注射生理盐水;内毒素组6只,静脉注射LPS,剂量为2.8 mg/kg.内毒素攻击后120 min,处死动物,取肾脏标本采用光镜、电镜铅离子捕获法做超微结构碱性磷酸酶(ALPase)及酸性磷酸酶(ACPase)细胞化学检查.结果:组织学观察显示肾髓质、皮质结构完整,肾小球结构完好;透射电镜可见模型组肾小球血管内皮和足突细胞损伤、血液成分渗出;肾小管上皮细胞损伤.肾实质细胞内溶酶体破坏;电镜酶细胞化学可见:模型组酸性磷酸酶活性增强,溶酶体颗粒增多.肾小管上皮细胞碱性磷酸酶活性急剧增强,在细胞器内弥散分布.对照组无明显病变.结论:在猕猴内毒素性休克早期,溶酶体增多和损伤引起了肾小球和肾小管损伤.在此同时,肾脏实质细胞内中和内毒素的作用也增强.

Abstract:目的:应用抑制差减杂交技术(supression subtractive hybridization,SSH)结合cDNA芯片筛选人肝细胞癌中差异表达基因.进一步探讨所筛选出的钙磷脂结合蛋白(annexinⅡ)在肝细胞中的表达及作用.方法:以肝癌组织和非肿瘤肝组织进行SSH,构建正、反向差减杂交文库,差减片断的PCR产物制备cDNA芯片,筛选出肝癌组织中差异表达基因.进一步应用荧光实时定量技术验证芯片结果,免疫组化方法分析annexinⅡ在肝细胞癌和正常肝组织中的表达.结果:成功构建了肝细胞癌差减杂交文库.芯片结果显示annexinⅡ在肝细胞癌中高表达并经荧光实时定量技术证实.免疫组化结果表明annexinⅡ在肝细胞癌和癌旁肝硬化组织中高表达,在正常肝组织中不表达(P＜0.05).在低分化肝细胞癌中annexinⅡ的表达有增高趋势.结论:SSH方法构建的肝细胞癌差减杂交文库富含肝细胞癌差异表达基因.肝细胞癌中高表达基因annexin Ⅱ可能与肝细胞的恶性转化,肝癌细胞的转移和侵袭能力有关.

Abstract:目的:研究来氟米特对被动性Heymann肾炎(PHN)的治疗作用,为临床膜性肾病的治疗提供依据.方法:Wistar大鼠尾静脉注射抗FX1A血清,建立PHN模型;用BCA法测量24h尿蛋白变化,用光镜、电镜观察肾脏病理改变,并用RT-PCR观察nephrin mRNA表达改变.结果:成功复制了PHN模型来氟米特能减轻PHN大鼠蛋白尿,肾脏病变程度,抑制nephrin mRNA表达减少.结论:来氟米特对PHN有一定的治疗作用,可能是通过提高nephrin表达及减少免疫复合物沉积来实现这一作用.

Abstract:目的:探索应用四环素灌胃建立小鼠急性肝损伤模型,并初步阐明其发生机制.方法:先以不同剂量四环素灌胃,18h后检测小鼠血清ALT、AST水平并进行光镜观察,探索导致明显急性肝损伤的相对合适剂量;再以相对合适剂量四环素灌胃,18、36、54、72 h后分别检测小鼠血清ALT、SOD、MDA、GSH-PX、IL-18水平及肝细胞凋亡情况,并进行光镜、电镜观察,探索导致明显急性肝损伤的相对合适时间及可能机制.结果:10倍和15倍剂量时,小鼠血清ALT、AST明显升高,肝细胞出现明显病理改变;应用10倍剂量四环素灌胃18h后,小鼠血清ALT和IL-18水平明显升高,肝细胞广泛损伤,细胞超微结构显著变化,肝细胞凋亡程度严重.结论:应用10倍剂量四环素灌胃18h可成功造成小鼠急性肝损伤模型,其发生与IL-18水平升高和肝细胞凋亡密切相关.

Abstract:目的:阐明TNF-α、可溶性E-选择素、L-选择素、ICAM-1、TGF-β1在肾综合征出血热(HFRS)发病机制中的作用.方法:34例HFRS患者(轻症组19例,重症组15例)按病期采血,分别用放射免疫法和ELISA检测TNFα、E-选择素、L-选择素、I-CAM-1和TGF-β1,并同期作肾功能和血常规检查.结果:从发热期至多尿期,血清TNF-α、E-选择素、L-选择素和ICAM-1水平均显著增高,而TGF-β1显著降低,TNF-α与BUN呈一致性变化趋势,而与血小板的变化趋势相反.结论:TNF-α、E-选择素、L-选择素、ICAM-1等细胞因子在肾综合征出血热发病机制中起重要作用,而TGF-β1水平下降可能是造成失控性全身炎症反应和多器官功能障碍综合征的重要因素之一;合理的对症治疗和适量使用免疫调节剂可望改善本病的预后.

Abstract:目的:探讨网织血小板(RP)、血小板生成素(Tpo)与慢性肝病血小板减少的关系.方法:分别用流式细胞仪和ELISA方法测定正常人群及慢性肝病患者RP和Tpo水平.结果:①与正常人群比较,慢性肝炎、肝硬化患者RP绝对计数均显著降低;肝病患者血小板正常组与减少组比较RP和RP％均有显著性差异.②与正常人群比较,慢性肝炎、肝硬化患者Tpo水平均无显著性差异;而肝病患者血小板正常组与减少组比较Tpo水平有显著性差异.结论:血小板减少的慢性肝病患者存在血小板的生成减少,而Tpo水平下降可能是血小板生成减少的一个重要原因.

Abstract:目的:检测并分析一中国先天性长QT综合征(Congenital long QT syndrome,LQTS)家系的基因突变.方法:分析根据家系的临床症状及心电图,初步判断出基因分型,聚合酶链反应法扩增基因的全部外显子并用DNA直接测序法检测基因突变.结果:患者临床表现符合HERG基因突变所致LQT2,DNA测序发现HERG基因1682位点C→T错义突变,致使氨基酸第561位密码子丙氨酸被缬氨酸取代(A561V),该突变位于HERG基因突变热点区域,为国内首次发现.结论:发现中国人HERG基因新突变,中国LQT2家系中患者具有与欧美及日本患者相同的致病突变.

Abstract:目的:观察无创通气(NIPPV)对无呼吸衰竭的轻中度慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者呼吸肌疲劳的影响.方法:44例COPD患者随机分为NIPPV组和对照组,观察治疗前后两组临床表现、动脉血气、肺功能、辅助呼吸肌动用评分、呼吸困难评分和预后的变化.结果:NIPPV组在通气2 h后显著改善动脉血气,降低心率和呼吸频率,减少辅助呼吸肌参与(P＜0.05),且在24 h后仍与对照组有显著差异.NIPPV组的肺功能在治疗后显著改善,住院时间也明显缩短.结论:轻中度COPD急性加重期患者虽无呼吸衰竭、但已存在呼吸肌疲劳,早期应用NIPPV能迅速缓解呼吸肌疲劳,改善气体交换,缩短住院时间,降低呼吸衰竭的发生率.

Abstract:目的:观察吸入低浓度一氧化碳(CO)对内毒素(LPS)性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)表达的影响.方法:采用尾静脉注射LPS复制大鼠ALI模型.雄性SD大鼠54只随机分为对照组、ALI组和ALI+CO组,每组18只(1 h、3 h、6 h时间点各6只).ALI组予LPS 5 mg/kg;ALI+CO组予LPS 5 mg/kg复制ALI模型后持续吸入250×10-6 CO;对照组予等量生理盐水以平衡各组液体入量.于观察时间点腹主动脉放血处死大鼠,开胸生理盐水肺灌洗,取左肺制作组织匀浆,离心上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织TNF-α和IL-10水平.另取右下肺组织制作病理切片,光镜观察并比较肺组织病理变化.结果:大鼠尾静脉注入LPS后,肺组织TNF-α表达明显增加,IL-10表达显著降低(P均＜0.05),肺组织损伤严重,但组内各时间点比较,差异并不明显(P均＞0.05);吸入低浓度CO后,与ALI组各对应时间点相比较,肺组织TNF-α表达显著降低,IL-10表达明显增加(P均＜0.05),组内各时间点比较,差异亦不明显(P均＞0.05),吸入CO明显减轻肺损伤.结论:吸入低浓度CO对LPS诱导大鼠ALI具有一定的保护作用,其机制部分是通过降低ALI大鼠肺组织TNF-α的表达和增加IL-10的表达来实现的.

Abstract:目的:探索肺炎型肺癌的影像学特征,以进一步提高对肺炎型肺癌的认识.方法:收集了18例经病理学证实的炎症型肺泡细胞癌,回顾性分析其病灶分布的范围、大小、部位及其影像特征并对其诊断要点进行评价.结果:18例肺炎型肺癌影像学表现两肺多发性分布7例,叶性分布8例,段性分布3例,所有病例均有实变存在,外周分布的15例,伴有不规则小结节的为8例,空气支气管征的11例,叶间裂向外突出的4例,实变影不均匀分布7例,不规则小囊腔6例,CT血管征2例.结论:肺炎型肺癌表现为典型的外周分布,空气支气管征、不规则小结节、叶间裂外突、多发小囊腔样改变等,但与感染性肺炎很难区分.对抗炎治疗反应不好的肺炎应警惕炎型肺癌可能,进行活检诊断.

Abstract:目的:探讨高脂饮食诱导下肥胖大鼠白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)、解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)基因与血清1α,25-(OH)2-D3的相关性.方法:①36只SD大鼠,标准饲料平衡1周后,随机分成2组,肥胖组和标准对照组,分组后分别用高脂饲料和标准饲料继续饲养6周;②采用ELISA方法测定血清1α,25-(OH)2-D3;③RT-PCR技术分析WAT中PPARγ和UCP2基因mRNA的表达水平.结果:①肥胖组大鼠的体重增值高于标准对照组(P＜0.05),提示肥胖模型制备成功.②肥胖大鼠血清1α,25-(OH)2-D3低于标准对照组(P＜0.05).③WAT中PPARγ和UCP2mRNA表达均高于标准对照组(P＜0.05).结论:肥胖大鼠WAT中PPARγ诱导UCP2高表达,1α,25-(OH)2-D3与UCP2mRNA表达趋势相反.

Abstract:目的:探讨功能矫形后退大鼠下颌后髁突软骨改建的分子调控机制.方法:SD大鼠40只,实验组配戴模拟临床功能矫治器,强制大鼠下颌后退,对照组不戴模拟矫治器,实验后3天、1、2、3周处死大鼠取髁突,HE染色观察组织学变化,免疫组织化学方法结合图像分析检测TGF-β1、TGF-β R1、IGF-1在髁突中的表达及分布.结果:实验组大鼠下颌后退1～2 mm,镜下见颞下颌关节髁突软骨厚度增加,以生发层和过渡层增加明显,细胞数增多,细胞体积增大,核肥大深染.髁突各层软骨细胞均有TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达,免疫组织化学阳性染色相对面积和积分灰度的比较显示:在功能矫形后退下颌后,实验组TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达较对照组明显增强,其差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:功能矫形后髁突软骨表现为增生改建、分化功能增强,其发生与TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达密切相关.

Abstract:目的:了解江苏地区社区人群甲状腺结节的患病率和流行病学特点.方法:采用分层随机整群抽样方法调查江苏省高淳和楚州地区18岁以上的常住居民2 280人,进行甲状腺B超检查和甲状腺功能检测.结果:调查对象的甲状腺结节的粗患病率为17.90％,标化患病率为14.04％,女性患病率高于男性,差异有统计学意义(P＜0.01);随着年龄的增长,结节的患病率呈显著升高趋势;男性和女性的甲状腺结节大小以及数量的构成比之间无显著差别.结论:江苏地区社区人群甲状腺结节的患病率较高,应重视甲状腺结节的随访和早期治疗.

Abstract:目的:探讨提高小鼠胰岛数量和质量的可靠方法.方法:采用胆管内胶原酶灌注和Histopaque 1 077密度离心法分离纯化胰岛.分别观察供体的体重、胶原酶的浓度、消化的时间及温度对胰岛分离起的作用.在体外,ELISA检测葡萄糖刺激引起的小鼠胰岛素分泌.在体内,胰岛移植评价胰岛对糖尿病小鼠血糖的调节功能.结果:高体重供体组胰岛的收获量显著高于低体重供体组(P＜0.01).胶原酶浓度、消化时间对胰岛收获量起重要作用.胰岛活率≥95％.体外胰岛素释放试验表明胰岛功能良好.同种异体胰岛移植的糖尿病小鼠高血糖状态得到逆转.结论:小鼠的体重、胶原酶的浓度、消化时间和温度是影响胰岛数量和功能的重要因素.