Page 116 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第5期
·698 · 南 京 医 科 大 学 学
120.26，117.39，113.54，105.24，42.96；ESI⁃MS m/z：
306.1［M⁃H］。
-
1.2.2.7 化合物27a~27b的合成
将化合物26a（1.03 g，5 mmol）和4⁃氨基⁃2⁃羟基
苯甲酸（0.77 g，5 mmol）溶于 20 mL 乙醇溶液中，升
o
温至 85 C，并向溶液中加入少量的甲酸，搅拌 5 h
后，冷却到室温，有黄色固体析出，抽滤，用少量乙醇
冲洗滤饼，干燥滤饼后，将滤饼加入到乙醇（7 mL）
溶液中，分批次加入硼氢化钠（0.19 g，5 mmol），溶
液由浑浊变得澄清，TLC 检测反应，反应结束后，
加入 2 mol/L 盐酸溶液调节 pH 至 5 左右，抽滤，取
滤液，加入超纯水（15 mL），有棕黄色固体析出，
抽滤，用大量超纯水冲洗滤饼，干燥后得到化合
物 27a。
按相同的方法，以化合物26b为原料，得到相应
的产物化合物27b。
4⁃（（1⁃（3，5⁃二氯⁃2⁃羟基苯基）乙基）氨基）⁃2⁃羟
基苯甲酸（27a）：棕黄色固体，产率 79%。m.p. 62~
64 ℃；H NMR（400 MHz，DMSO⁃d6 ）δ 9.70（s，1H），
1
8.87（s，1H），7.28（d，J=2.6 Hz，1H），7.15（d，J=2.6
Hz，1H），6.73（t，J=8.0 Hz，1H），6.04（d，J=7.0 Hz，
1H），5.90（dt，J=8.0，2.0 Hz，2H），5.82（t，J=2.1 Hz，
1H），4.66（t，J=6.6 Hz，1H），1.30（d，J=6.7 Hz，3H）；
C NMR（101 MHz，DMSO⁃d6 ）δ 158.6，149.6，149.2，
13
137.7，130.0，127.2，125.1，124.1，122.2，104.8，
104.4，100.3，47.4，22.8；ESI⁃MS m/z：342.2［M+H］。
+
4⁃（（1⁃（3，5⁃二氯⁃2⁃羟基苯基）丙基）氨基）⁃2⁃羟
基苯甲酸（27b）：黄褐色固体，产率 56%。m.p. 76~
1
78 ℃；H NMR（400 MHz，Chloroform⁃d）δ 7.68（d，J=
7.5 Hz，1H），7.30（d，J=1.4 Hz，1H），7.26（t，J=1.2 Hz，
1H），6.54（d，J=11.5 Hz，1H），6.29（dd，J=7.4，1.5 Hz，
1H），6.03（d，J=1.4 Hz，1H），5.01（dtd，J=11.5，7.0，
1.0 Hz，1H），2.04⁃1.86（m，2H），0.95（t，J=8.0 Hz，
3H）； C NMR（101 MHz，Chloroform ⁃ d）δ 171.64，
13
163.41，151.78，151.56，131.70，129.68，129.35，
128.90，128.40，121.29，105.74，103.06，100.65，
55.56，28.13，10.58；ESI⁃MS m/z：356.2［M+H］。
+
1.2.2.8 化合物29的合成
将化合物18b（0.34 g，1 mmol）溶于3 mL乙醇溶
液中，加入甲醛水溶液1.5 mL，常温搅拌5 h，TLC检
测反应，反应结束后，有白色固体析出，抽滤，用少
量乙醇冲洗滤饼，经硅胶柱色谱（展开剂∶石油醚∶
乙酸乙酯= 10∶1）纯化得到化合物28直接用于下一
步反应。
报 2023年5月
将化合物28（0.35 g，1 mmol）加入到乙醇（7 mL）
溶液中，分批次加入硼氢化钠（0.19 g，5 mmol），溶液
由浑浊变得澄清，TLC 检测反应，反应结束后，加入
2 mol/L 盐酸溶液调节 pH 至 7 左右，抽滤，取滤液，
加入超纯水（15 mL），有白色固体析出，抽滤，用大
量超纯水冲洗滤饼，干燥滤饼后，将滤饼加入到甲
醇（10 mL）中，在 0 C 下加入 2 mol/L 氢氧化钠溶液
o
（7 mL），升温至 45 C 搅拌 3 h。TLC 检测反应，反
o
应结束后，将甲醇蒸除后，用 1 mol/L 的稀盐酸调节
pH 至 5 左右，有白色固体析出，抽滤，干燥得目标
化合物 29。
4⁃（（3，5⁃二氯⁃2⁃羟基苄基）（甲基）氨基）⁃2⁃羟
基 苯 甲 酸（29）：白 色 固 体 ，收 率 83% 。 m.p. 76~
78 ℃；H NMR（400 MHz，Chloroform⁃ d）δ 9.91（s，
1
1H），7.70（d，J=7.5 Hz，1H），7.30（d，J=1.4 Hz，1H），
7.09（dt，J=1.9，1.1 Hz，1H），6.37（dd，J=7.5，1.6 Hz，
1H），6.30（d，J=1.5 Hz，1H），4.61（d，J=0.9 Hz，2H），
13
3.05（s，3H）； C NMR（101 MHz，Chloroform ⁃ d）δ
171.73，162.99，151.91，150.41，131.47，129.36，
128.20，127.89，127.44，121.72，105.89，102.18，
101.28，51.14，38.67；ESI⁃MS m/z：340.1［M⁃H］。
-
1.2.3 化合物对人神经母细胞瘤细胞（SH⁃SY5Y）抗
增殖实验
细胞毒性通过 CCK⁃8 细胞增殖检测法进行检
测，阴性组、阳性组、待测样品组的待测物均先溶于
DMSO（终浓度不超过 0.5%），用生理盐水稀释至终
浓度为1 mmol/L。将细胞消化、计数，配制细胞悬液
4
7×10 个/mL，96孔细胞培养板中每孔加入100 μL细
胞悬液；将96孔细胞培养板置于37 ℃、5% CO2培养
箱中培养24 h。
用 培 养 基 稀 释 药 物 至 所 需 工 作 液 浓 度
（25 μ mol/L），每孔加入 100 μL 相应的含药培养
基，同时设立阴性对照组；将 96 孔细胞培养板置于
37 ℃，5% CO2培养箱中培养24 h，再将96孔板进行
CCK⁃8染色，λ=450 nm，测定吸光度。代入公式：抑制
率=（D 阴性对照⁃D 实验 ）/D 阴性对照×100% 计算抑制率。
1.2.4 化合物对人神经母细胞瘤细胞（SH⁃SY5Y）保
护活性测试
谷氨酸诱导损伤的 SH⁃SY5Y 细胞的保护作用
通过 LDH 试剂盒进行检测。阴性组、阳性组、待测
样品组的待测物均先溶于 DMSO（终浓度不超过
0.5%），用生理盐水稀释至终浓度为 1 mmol/L。将
细胞消化、计数，配制细胞悬液 1.4×10 个/mL，96 孔
5
细胞培养板中每孔加入50 μL细胞悬液，将96孔细