Page 38 - 南京医科大学自然版

第44卷第11期
·1504 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年11月

A B C
1.0 HR=1.45（1.27-1.66） 1.0 HR=1.17（1.01-1.35） 1.0 HR=1.25（1.09-1.43）
Log⁃rank P < 0.001 Log⁃rank P=0.039 Log⁃rank P < 0.001
0.8 0.8 0.8
Probability 0.6 Probability 0.6 Probability 0.6

0.4
0.4
0.4
Expression Expression Expression
0.2 0.2 0.2
Low Low Low
High High High
0 0 0
0 50 100 150 200 250 0 50 100 150 200 250 0 50 100 150 200 250
Time（months） Time（months） Time（months）
Number at risk Number at risk Number at risk
Low 1 135 324 75 15 2 0 Low 0 475 125 28 06 1 0 Low 1 034 290 70 14 1 0
High 0 521 104 22 03 0 0 High 1 181 303 69 12 1 0 High 0 622 138 27 04 1 0
Kaplan⁃Meier overall survival curves of patients with high or low LOX expression. with the probes of 215446_s_at（A），213640_s_at（B），and
204298_s_at（C）.
图2 3种不同的LOX探针检测LOX表达水平与卵巢癌患者总生存期的相关性
Figure 2 Three different LOX probes were used to detect the correlation between the expression levels of LOX and the
overall survival of ovarian cancer patients

2.2 LOX 在肿瘤相关成纤维细胞中高表达，敲降 2.3 PTX上调成纤维细胞LOX表达，敲降LOX增强
LOX 可抑制成纤维细胞中细胞黏附分子的表达 卵巢癌细胞PTX敏感性
由于肿瘤存在显著的异质性，为探究卵巢癌中 PTX与铂类药物联合化疗是卵巢癌的常规化疗
LOX表达特征及其调节肿瘤进展的机制，首先利用 方案 ［19］ 。为了探索 LOX 在卵巢癌化疗中的作用。
TISCH2 单细胞数据库探索了 LOX 在卵巢癌组织中 使用不同浓度的 PTX 和 CBP 处理成纤维细胞 48 h，
的表达特征，结果发现，在卵巢癌中，LOX mRNA 主 从 mRNA 及蛋白水平验证 PTX 及 CBP 对成纤维细
要在成纤维细胞中高表达，而在其他细胞中表达量 胞中 LOX 表达的影响，结果发现 CBP 处理不影响
较低（图3A）。随后，在人卵巢癌组织及癌旁对照组 LOX的mRNA和蛋白水平（图5A、B），而PTX处理组
织中，通过LOX与α⁃SMA免疫组化染色发现，卵巢癌 LOX 的 mRNA 及蛋白水平均增加（图 5C、D）。进一
组织中LOX蛋白水平高于癌旁组织，差异有统计学 步在小鼠成纤维细胞系L929细胞中验证发现，PTX
意义（图3B~D，P < 0.001）。LOX在卵巢癌组织成纤 可上调 LOX 的表达（图 5E、F）。以上结果表明 PTX
维细胞及卵巢癌细胞中均有表达，但在成纤维细胞中 化疗可上调成纤维细胞中LOX的表达。
的蛋白水平相对更高。 前期已经证明 LOX 高表达与卵巢癌初始治疗
为进一步验证其可能的作用机制，首先分离了 的结局显著相关。为探讨其是否通过成纤维细胞
人源成纤维细胞，并通过α⁃SMA 及 Vimentin 免疫荧 调控卵巢癌初始治疗结局，将人源成纤维细胞与
光染色，证明其高表达成纤维细胞分子标志物（图 卵巢癌细胞（A2780 和 OV⁃CAR3）共培养，使用浓
4A、B）。接着，利用siRNA沉默人成纤维细胞中LOX 度梯度的 PTX 处理共培养的细胞后，检测各培养
表达，将siLOX组（n=3）及siCtrl组（n=3）细胞进行转 组对 PTX 的 IC50。结果显示，与单独培养的肿瘤细
录组测序发现，siLOX组中46个基因显著上调，165个 胞组比较，成纤维细胞与肿瘤细胞共培养组 PTX
基因显著下调（Padjust<0.05，FC≥2.0，图 4C）。随后， IC50 升高［A2780：339.91 ng/mL vs. 2 120.22 ng/mL；
通过 GSEA 发现，siLOX 组的人源成纤维细胞中细 OV⁃CAR3：130.78 ng/mL vs. 1 924.14 ng/mL］。肿瘤细
胞黏附通路归一化的富集得分（enrichment score， 胞与成纤维共培养时，与对照组相比，成纤维细胞LOX
ES）为-1.29（P=0.034），提示 LOX 可能通过抑制细 敲降组 PTX IC50 ［A2780：si⁃Ctrl 组 2 120.22 ng/mL vs.
胞黏附通路表达来发挥作用（图4D）。基于GSEA结 siLOX⁃1组1 314.84 ng/mL，siLOX⁃2组1 278.29 ng/mL；
果，转染siRNA 沉默LOX后验证部分细胞黏附通路 OV⁃CAR3：si⁃Ctrl 组 1 924.14 ng/mL vs. siLOX⁃1 组
mRNA水平表达变化，发现在siLOX组的人源成纤 1 226.22 ng/mL，siLOX⁃2组1 217.75 ng/mL］（图6）。
维细胞中 ITGAV、PTPRF、CLDN2、CD34 等细胞黏
3 讨 论
附通路分子mRNA水平显著降低（图4E），提示敲降
LOX 可抑制成纤维细胞中细胞黏附分子的表达。 LOX已被证实在多种肿瘤中参与肿瘤的发生与