利用Crisper/Cas9技术构建肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠
DOI:
作者:
作者单位:

1.南京医科大学附属逸夫医院中心实验室;2.南京医科大学附属逸夫医院检验科;3.南京医科大学附属逸夫医院骨科

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通讯作者:

中图分类号:

基金项目:

] 国家自然科学基金(32271187,32071142),江苏省青蓝工程(KY520R202025),省部共建协同创新中心(JZ21449020210617),南京市卫生科技发展专项资金项目(YKK21256)


Establishment of liver-specific Lcat knock-in mouse models by the Crisper/Cas9 technique
Author:
Affiliation:

Department of Central Laboratory,Sir Run Run Hospital,Nanjing Medical University

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    摘要:

    目的:通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术构建卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(lecithin-cholesterolacyltransferase,LCAT)基因敲入C57BL/6小鼠并与肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠配繁得到肝脏特异性敲入Lcat基因C57BL/6小鼠模型。为研究Lcat基因在肝脏相关代谢疾病发生机制的研究提供动物模型。方法:利用CRISPR/Cas9技术构建Lcat基因敲入小鼠;利用肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠与Lcat基因敲入小鼠交配得到肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠;通过PCR法鉴定小鼠的基因型 ;利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)技术验证Lcat基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果:PCR结果显示肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠的构建成功;qPCR结果显示Lcat基因在肝脏中特异性高表达;WB结果显示LCAT蛋白在肝脏特异性敲入Lcat小鼠肝脏中有明显更高的表达。结论:成功构建肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠,为在动物水平探索Lcat基因在肝脏相关代谢疾病中的功能及相关发病机制提供研究平台。

    Abstract:

    Objective: To construct lecithin-cholesterolacyltransferase (LCAT) knock-in mice by CRISPR/Cas9-mediated gene editing and to obtain liver-specific overexpression of Lcat mice by mating with liver-specific Cre-expressing transgenic mice. Providing an animal model for the study of the mechanism of the Lcat gene in the development of liver-related metabolic diseases. Methods: Lcat knock-in mice were constructed by CRISPR/Cas9 technology; Liver-specific Cre-expressing transgenic mice were mated with Lcat knock-in mice to obtain liver-specific overexpressing Lcat mice; Genotyping mice by PCR; Quantitative Real-time

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  • 收稿日期:2023-01-28
  • 最后修改日期:2023-04-15
  • 录用日期:2023-10-18
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