目的:利用Bac-to-Bac表达系统高效表达成熟的胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)。方法:首先构建含IGF-Ⅱ cDNA的重组供体质粒pFastBac1,然后重组pFastBac1所含的转位元件mini-Tn7,在感受态细胞DH10Bac内转位到粘粒上的连接位点mini-attTn7构成重组粘粒,重组粘粒转染昆虫细胞Sf9产生重组杆状病毒,重组杆状病毒进行感染Sf9细胞。结果:琼脂糖凝胶分析显示重组供体质粒pFastBac1的成功构建;琼脂糖凝胶分析重组粘粒的PCR产物表明已获得重组粘粒;十二烷基磺酸钠(SDS)-PAGE和Western Blotting显示7KD左右蛋白质条带的出现。结论:利用Bac-to-Bac表达系统成功表达具有免疫学活性的IGF-Ⅱ,可用于临床疾病的诊治。
赵红,汪承亚,段宇,P. H. Steenbergh, J. S. Sussenbach,陈家伟.利用Bac-to-Bac表达系统高效表达胰岛素样生长因子Ⅱ[J].南京医科大学学报(自然科学版),2001,21(03):