摘要:目的:分离克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码IL-6基因(vIL-6),并导入NIH3T3细胞中进行真核表达.方法:根据KSHV编码IL-6基因核苷酸序列设计一对引物,在引物的5'端分别引入BamH Ⅰ、HindⅢ酶切位点,以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增vIL-6基因,PCR产物经双酶切克隆进真核载体pcDNA3.1(+).进一步在原有的下游引物5'端加上一段flag序列,以经过序列测定正确的重组质粒为模板,PCR扩增vIL-6-flag融合基因,构建含vIL-6-flag的重组质粒.将该质粒转染NIH3T3细胞,经G418筛选获细胞抗性克隆.最后用抗flag M2单克隆抗体进行Western blot检测vIL-6在NIH3T3细胞中的表达.结果:获得vIL-6-flag融合基因,全长671 bp,其中vIL-6基因核苷酸序列与GenBank中所登记的KSHV vIL-6基因呈现100﹪同源性.Western blot结果显示,在约25 ku位置有目的条带,与预期的重组vIL-6-flag融合蛋白大小一致.结论:KSHV vIL-6编码基因在NIH3T3细胞中初步获得表达.
