目的：构建靶向Nogo-A基因的短发夹样RNA（short hairpin RNA,shRNA）真核表达载体。方法：根据Gene bank中提供的Nogo-A基因核苷酸序列，设计并化学合成2条shRNA，退火后克隆到pGenesil-1质粒的U6启动子下游从而构建重组载体，行限制性内切酶酶切和基因测序进行鉴定。结果：序列分析结果表明，两个重组质粒的shRNA编码序列均成功插入到预定位置。结论：成功构建靶向Nogo-A的shRNA真核表达载体，为进一步研究Nogo-A蛋白的功能及轴突再生抑制的基因治疗提供了新的方法。