摘要:目的:克隆-表达肿瘤特异性凋亡抑制因子(Survivin),并对其在人肝癌诊断中的意义进行研究-方法:从人白血病细胞系HL60提取总RNA,用RT-PCR 方法扩增出Survivin基因片段-将Survivin基因片段插入载体pMD-18T中,测序正确后亚克隆到原核表达载体pGEX-2TK中-IPTG诱导重组质粒pGEX-2TK-Survivin在大肠杆菌BL21中表达N端融合GST的目的蛋白,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,经SDS-PAGE分析后,将所得产物用Thrombin裂解后进行Western blot鉴定-将获得的目的蛋白包板,用ELISA法初步检测了肝癌患者血清中抗Survivin蛋白的表达-结果:克隆了人Survivin基因-表达出相对分子质量约为16.2 ku的蛋白并进行了肝癌患者血清的检测应用-结论:成功克隆-表达和纯化了Survivin基因和融合蛋白,为进一步探讨以Survivin为基础的肿瘤诊断和治疗奠定了实验基础-