摘要:目的:构建流感病毒FM1非结构蛋白NS1全长基因表达载体在大肠杆菌(E.coli)中表达,并将表达蛋白用于病毒感染和疫苗免疫小鼠的血清检测-方法:提取流感病毒鸡胚尿囊液RNA,RT-PCR扩增NS1全长基因,克隆到pET28a,转化E.coli BL21感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出阳性重组质粒pET28-NS1-异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达蛋白在变性条件下经镍柱亲和层析纯化,并用Western blot法检测其抗原活性-以纯化的NS1蛋白为抗原建立了检测NS1抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法分别对7-15和30天灭活疫苗免疫和病毒感染小鼠血清进行检测-统计分析各组吸光度(A)差异,并以灵敏度-特异度-阳性预测值-阴性预测值等指标对NS1-ELISA进行方法学评价-结果:重组质粒经PCR 及酶切鉴定为阳性, 核酸序列分析正确-SDS-PAGE 和Western blot 结果显示表达重组蛋白分子质量约为26 ku-NS1-ELISA法在第15~30天,感染组血清吸光度明显高于疫苗免疫组-结论:成功获得了NS1重组基因表达蛋白,建立的NS1-ELISA法可用于病毒感染和疫苗免疫血清的鉴别检测-