摘要:目的:利用慢病毒表达载体将HIV-1 Vif基因导入原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞BCBL-1中使之持续表达目的蛋白Vif,并检测Vif对其中潜伏KSHV裂解性周期复制的影响-方法:自表达质粒pCI-neo-Vif中扩增出Vif基因,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中构建成慢病毒载体pHAGE-Vif,利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞-荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况;收集培养上清经0.45 μm滤器过滤后即获得病毒悬液-梯度稀释法测定病毒滴度,感染293T细胞,48 h或72 h后进行RT-PCR和Western blot检测Vif基因的转录和表达情况-以MOI为1.0的病毒量感染靶细胞BCBL-1,利用Western blot技术检测Vif蛋白的表达,同时检测KSHV vIL-6和Rta的蛋白表达水平,初步探讨Vif对KSHV复制的影响-结果:限制性内切酶检测和基因测序证实成功构建了携带Vif基因的慢病毒表达载体,滴度为4×107 efu/ml-以MOI为1.0的重组慢病毒感染靶细胞BCBL-1 72 h后,能够检测到外源基因Vif的蛋白表达-Western blot结果初步显示,Vif能够下调vIL-6和Rta的蛋白表达水平-结论:成功构建了含Vif基因的慢病毒表达载体,获得的病毒能够有效感染BCBL-1细胞,并在其中大量表达目的蛋白-初步结果提示,Vif能够下调vIL-6和Rta的蛋白表达水平,对KSHV裂解性周期复制可能起到抑制作用-