摘要:目的:从临床乳腺癌组织中扩增肿瘤相关抗原Trop-2胞外肽段基因,在大肠杆菌中表达重组蛋白,并对该蛋白的生物学特性进行鉴定-方法:RT-PCR扩增Trop-2胞外肽段基因并克隆于pMD18-T载体中进行测序分析,用NcoⅠ和EcoRⅠ将含Trop-2 胞外区重组基因的质粒双酶切后,克隆到pBAD-gⅢ中-重组质粒经酶切鉴定-核酸序列分析后转化大肠杆菌TOP10,以L-阿拉伯糖诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经后His柱亲和层析纯化后,用Western blot-ELISA检测鉴定-结果:重组表达质粒经酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确-SDS-PAGE 和Western blot 显示,表达的重组蛋白分子质量约为38 ku,此抗原能够与商业化抗体特异性结合-结论:成功制备Trop-2胞外区重组基因表达的蛋白,并证明原核表达的Trop-2胞外肽段保持了原有的抗原性-