ATP与P2X7受体在Müller细胞激活导致视网膜神经节细胞株RGC-5凋亡中的作用研究
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国家自然科学基金资助(81200680)


Involvement of P2X7 receptor and ATP in Müller cell gliosis induced RGC-5 cells apoptosis
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    目的:探讨Müller细胞胶质化激活对RGC-5细胞的影响及ATP与P2X7受体在其中的相关作用-方法:纯化培养Müller细胞-RGC-5细胞株,免疫荧光进行细胞鉴定,并观察加入DHPG后Müller细胞的GFAP表达情况-荧光素酶法检测加入DHPG后Müller 细胞外ATP的含量变化;DHPG刺激后的培养液作为条件培养基加入RGC-5细胞株(RGC-5预先使用MPEP及MPMQ处理2 h),TUNEL法检测RGC-5凋亡情况,预先加入P2X7受体阻断剂亮蓝G(brilliant blue G,BBG)后检测RGC-5的凋亡情况-同时使用Western blot检测抗凋亡蛋白及促凋亡蛋白Bcl-2和Bax的变化情况-免疫荧光及Western blot检测RGC-5上P2X7受体的表达变化-结果:DHPG激活Müller 细胞后可以导致细胞外ATP的增加;激活的Müller 细胞条件培养基(conditioned medium,CM)可以导致RGC-5凋亡的明显增加-而BBG可以抑制RGC-5凋亡的增加,同时Western blot也显示与对照组相比CM显著降低RGC-5细胞上的Bcl-2蛋白水平,但增加了Bax的蛋白表达,而当预先加入BBG后再用CM处理则呈现相反的结果-另外Western blot及免疫荧光显示加入条件培养基后RGC-5细胞的P2X7受体蛋白表达增加-结论:Müller细胞的激活可以导致RGC-5细胞的凋亡,该现象可能与Müller细胞激活引起的ATP释放增加及RGC-5上P2X7受体有关-

    Abstract:

    Objective:To explore the possible involvement of Müller cell gliosis,ATP/ P2X7 receptors and RGC-5 apoptosis in vitro. Methods:We cultured and purificated rat retinal Müller cells,RGC-5. The concentration of extracellular ATP was quantified by bioluminescence assay. After adding the medium of DHPG-activated Müller cells Medium(conditioned medium /CM)to RGC-5 cells,TUNEL assay and Western blot of anti-and pro-apoptotic proteins were used to observe RGCs apoptosis. Immunofluorescence and Western blot were also used to detect the P2X7 expression of RGC-5 with CM. Results:DHPG induced an increasing ATP release from Müller cells. After adding the CM to RGC-5 cells,TUNEL assay showed a significantly increase RGCs apoptosis while P2X7 receptor blocker BBG reduced apoptosis of RGCs. Moreover,CM treatment of RGC-5 cells significantly increased Bax protein level and decreased Bcl-2 protein level,which was also mimicked by BzATP and blocked by BBG,respectively. Conclusion:The current study suggests that DHPG-activated Müller cells could aggravate RGCs apoptosis,while the release of ATP from Müller cells and the activation of P2X7 receptor in the RGC-5 might be involved in this process.

    参考文献
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    引证文献
引用本文

薛 博,季 敏,管怀进. ATP与P2X7受体在Müller细胞激活导致视网膜神经节细胞株RGC-5凋亡中的作用研究[J].南京医科大学学报(自然科学版),2016,(2):182-188

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  • 收稿日期:2015-07-07
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  • 在线发布日期: 2016-02-29
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