目的：探索莫西沙星辅助多光子显微成像（multiphoton microscopic imaging，MPM）在小鼠溃疡性结肠炎中应用的可行性，总结结肠炎小鼠MPM辅助诊断特征。方法：将32只Balb/c小鼠随机分为对照组、急性期结肠炎组、缓解期结肠炎组和慢性期结肠炎组，每组8只，饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液建立结肠炎模型，经病理证实各组小鼠均造模成功。对各小鼠结肠组织行MPM成像，再将同一结肠组织在0.16%莫西沙星溶液中浸泡2 min，再行MPM成像。比较未经莫西沙星处理和经莫西沙星处理的结肠组织MPM清晰成像所需激发功率以及相同激发功率下未经莫西沙星处理和经莫西沙星处理的MPM图像荧光强度；比较莫西沙星处理后各模型组结肠组织荧光增强区域所占比例；归纳不同溃疡性结肠炎模型未经莫西沙星处理和经莫西沙星处理的MPM成像特征。结果：在能看到清晰图像的情况下，未经莫西沙星处理和经莫西沙星处理的对照组小鼠MPM成像所需的激发光功率分别为（2.78 ± 0.04）mW、（0.28 ± 0.01）mW，两者差异具有统计学意义（P < 0.05）；相同激发功率下，未经莫西沙星处理和经莫西沙星处理的对照组小鼠MPM平均荧光强度分别为（1 313.99 ± 164.52）a.u.、（3 896.43 ± 87.55）a.u.，两者差异具有统计学意义（P < 0.05）；经莫西沙星处理的对照组、急性期结肠炎组、缓解期结肠炎组、慢性期结肠炎组的平均荧光增强区域所占比例分别为（22.4 ± 1.6）%、（7.7 ± 1.0）%、（13.5 ± 1.7）%、（5.0 ± 1.3）%，后3组与对照组的差异均有统计学意义（P < 0.05）。莫西沙星可辅助MPM清晰成像组织隐窝开口、腺体结构、相邻腺体间隙和荧光增强区域等。结论：莫西沙星可有效提高MPM成像效率，并呈现独特的组织功能性鉴别特征，结合多维度的量效和结构特征，可有效鉴别溃疡性结肠炎小鼠。