目的：了解重症监护病房（ICU）患者分离菌的分布情况及耐药特点，为重症感染患者经验用药提供依据。方法：回顾性分析 2015年1月— 2017年12月南京医科大学附属江宁医院ICU住院患者细菌及真菌培养阳性病例，分析其菌群分布及耐药性。结果：检出非重复分离菌1 765株，其中革兰阴性菌1 334株（75.6%），革兰阳性菌200株（11.3%），真菌231株（13.1%）。排名前10位的分离菌分别为：铜绿假单胞菌（17.1%）、鲍曼不动杆菌（16.0%）、肺炎克雷伯菌（14.8%）、大肠埃希菌（11.3%）、奇异变形杆菌（10.4%）、白色念珠菌（6.3%）、表皮葡萄球菌（5.8%）、光滑念珠菌（3.3%）、金黄色葡萄球菌（2.8%）及黏质沙雷菌（2.3%）。肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、黏质沙雷菌及奇异变形杆菌中产超广谱β内酰胺酶（ESBL）株分别占54.6%、82.0%、19.5%和5.4%；耐碳青霉烯的肠杆菌科细菌（CRE）占17.5%；鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌中多重耐药（multi-drug resistant，MDR）株分别占85.8%和33.2%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌检出率分别为49.0%和97.1%；未分离出耐万古霉素肠球菌。念珠菌属对伏立康唑、两性霉素B及5-氟胞嘧啶均无耐药。结论：ICU分离菌以革兰阴性菌为主，且MDR株检出率高。应加强对ICU多重耐药菌来源及传播途径的监测和综合管理。