目的：建立肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.au）、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，KP）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，P.Ae）、阴沟杆菌（Enterobacter cloacae，Ecl）、白色假丝酵母菌（Candida albicans，Cal）、鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，Aba）7种儿童呼吸道病原体多重PCR结合毛细管电泳法检测体系。方法：随机收集南京市儿童医院2020年11—12月266例儿童呼吸道病原体样本，针对MP、S.au、KP、P.Ae、Ecl、Cal、Aba保守序列设计特异性引物，设计并优化多重PCR结合毛细管电泳检测体系；将该检测结果与细菌培养以及荧光定量PCR比对，评估该方法的检测性能（灵敏度、特异度）。结果：所设计引物可以特异性扩增出呼吸道病原体；多重PCR结合毛细管电泳检测体系检出敏感性高；与其他呼吸道感染病原体未出现交叉反应，无明显的非特异峰，特异性较好。结论：成功建立一种能够快速筛查7种常见儿童呼吸道病原体的多重PCR结合毛细管电泳的检测方法。