USP14调控OSBPL2蛋白去泛素化作用的实验研究
作者:
作者单位:

作者简介:

通讯作者:

中图分类号:

基金项目:

国家自然科学基金(81771000,82071052)


Experimental study on USP14 regulating the deubiquitination of OSBPL2 protein
Author:
Affiliation:

Fund Project:

  • 摘要
  • |
  • 图/表
  • |
  • 访问统计
  • |
  • 参考文献
  • |
  • 相似文献
  • |
  • 引证文献
  • |
  • 资源附件
  • |
  • 文章评论
    摘要:

    目的:研究泛素特异性蛋白酶14(ubiquitin-specific peptidase 14,USP14)通过调控氧化固醇结合样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)的泛素化水平稳定OSBPL2表达的分子机制。方法:以HeLa细胞为工具细胞,通过对USP14过表达、敲降以及活性抑制,检测OSBPL2的表达水平;采用体外过表达实验考察USP14对OSBPL2的泛素信号和泛素化水平的调控;采用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)阐明USP14与OSBPL2相互作用的具体结构域、不同结构域在蛋白相互作用中的作用以及OSBPL2的关键泛素化位点。结果:USP14与OSBPL2存在相互作用关系并稳定OSBPL2的表达而不改变其转录水平;体外过表达和Co-IP实验结果表明,USP14催化(catalytic,CAT)结构域与OSBPL2氧固醇结合蛋白相关结构域(OSBP-related domain,ORD)的相互作用降低OSBPL2的泛素化水平;类泛素(ubiquitin-like,UBL)结构域在USP14与OSBPL2相互作用中起到了促进作用;Lys209和Lys361是OSBPL2泛素化和去泛素化的关键位点。结论:USP14通过调控OSBPL2蛋白Lys209和Lys361两个位点的泛素化进而调控其泛素化水平,稳定OSBPL2蛋白的表达。

    Abstract:

    Objective:This study aims to explore the molecular mechanism of ubiquitin-specific peptidase 14(USP14) instabilizing oxysterol binding protein-like 2(OSBPL2) expression by regulating the ubiquitination level of OSBPL2. Methods:HeLa cells was used as tool cells to detect the expression of OSBPL2 by overexpression,knockdown and activity inhibition of USP14. The regulation of USP14 on ubiquitin signal and ubiquitination level of OSBPL2 was investigated in vitro. The specific domain of USP14 interacting with OSBPL2,the interactional role of different domains and the key ubiquitination sites of OSBPL2 were determined by Co-immunoprecipitation(Co-IP). Results:USP14 interacted with OSBPL2 and stabilized the expression of OSBPL2 without changing its transcriptional level. In vitro ubiquitination experiment and Co-IP showed that the catalytic(CAT) domain of USP14 interacted with the OSBP-related domain(ORD)of OSBPL2,which reduced the ubiquitination level of OSBPL2. The ubiquitin-like(UBL)domain of USP14 could promote the interaction between USP14 and OSBPL2. In addition,Lys209 and Lys361 could be the key sites for OSBPL2 ubiquitination and deubiquitination. Conclusion:USP14 modulated the ubiquitination level of OSBPL2 by regulating the ubiquitination of Lys209 and Lys361 and further stabilized OSBPL2 expression.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

张洪都,王红顺,王天明,姚 俊,曹 新. USP14调控OSBPL2蛋白去泛素化作用的实验研究[J].南京医科大学学报(自然科学版),2022,42(6):759-767

复制
分享
文章指标
  • 点击次数:
  • 下载次数:
  • HTML阅读次数:
  • 引用次数:
历史
  • 收稿日期:2021-11-12
  • 最后修改日期:
  • 录用日期:
  • 在线发布日期: 2022-06-21
  • 出版日期:
通知关闭
郑重声明