摘要:目的:制备人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定.方法:用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含重组质粒pGEX-6p-1+K8.1的大肠杆菌BL21表达谷胱甘肽-S-转移酶GST/K8.1融合蛋白,将以包涵体形式存在的融合蛋白进行变性、复性、复性后的Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化.以纯化的GST/K8.1融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备单克隆抗体.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选分泌K8.1单抗的杂交瘤细胞株.免疫组化染色(IHC)和Western blot法鉴定单抗的特异性.结果:建立了一株稳定分泌抗K8.1单抗的杂交瘤细胞株,命名为3G10;IHC和Western blot法显示,3G10株单抗能特异地识别HHV-8 K8.1蛋白.结论:成功制备出抗HHV-8包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体.

摘要:目的:探讨高脂高能量饮食诱导下肥胖易感(obesity-prone,OP)大鼠与肥胖抗性(obesity-resistance,OR)大鼠腹膜后脂肪组织中脂联素基因mRNA表达的差异.方法:18只雄性SD大鼠,以高脂高能量鼠料饲养2周后,按体重增值大小分组,增重最多6只为OP组,增重最少6只为OR组.OP、OR大鼠继续饲以高脂高能量鼠料4周后,观察各大鼠体重变化和腹膜后脂肪组织湿重,并采用RT-PCR技术检测脂肪组织中脂联素基因的mRNA表达水平.结果:①高脂高能量鼠料诱导下,OP组大鼠体重、腹膜后脂肪组织湿重均明显高于OR组(P＜0.01);②OP组大鼠腹膜后脂肪组织中脂联素基因的mRNA表达水平显著低于OR组(P＜0.05);③大鼠腹膜后脂肪组织湿重与脂联素基因mRNA的表达水平间存在显著的负相关关系(P＜0.05).结论:相同饮食条件下,个体发生肥胖的易感性是影响脂联素水平的重要因素.

摘要:目的:研究散发性乳腺癌患者中,乳腺癌易感基因-1(BRCA1)的突变情况,并探讨其临床意义.方法:采用聚合酶链反应-单链构像多态性分析(PCR-SSCP)、标记染色双脱氧末端法DNA测序,对27例散发性乳腺癌患者以及正常对照组8例进行BRCA1基因全序列外显子突变检测.结果:27例患者中发现1例第16外显子基因突变,突变率为3.7％(1/27例);突变形式为4804C→G,突变结果引起单个氨基酸改变,使编码子1 562由精氨酸代替脯氨酸.结论:在散发性乳腺癌患者中BRCA1基因突变率较低(3.7％),BRCA1可能通过突变以外的调节方式起作用.

摘要:目的:研究巴曲酶对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元凋亡的影响及时间效应关系,探讨其可能的作用机制.方法:采用双侧颈总动脉夹闭5 min后再通建立沙土鼠前脑缺血再灌注的损伤模型,在不同时间点腹腔注射巴曲酶(8 BU/kg)对其进行治疗,运用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP-生物素切口末端标记法(TUNEL)及免疫组织化学方法,检测沙土鼠海马CA1区神经元中的TUNEL染色阳性细胞数及凋亡相关基因Bcl-2、Bax免疫反应阳性细胞数.结果:治疗组TUNEL染色阳性细胞数明显减少,与对照组之间差异有显著性(P＜0.05);与对照组相比,治疗组海马CA1区Bcl-2表达明显增加,Bax表达降低,尤以缺血再灌注前6 h、即刻、缺血再灌注后1、3及6 h最明显(P＜0.01).结论:巴曲酶可减少脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡,发挥脑保护作用,其作用存在明显时效关系,机制可能是增强Bcl-2的表达及抑制Bax的表达有关.

摘要:目的:探讨神经节苷脂对活体实验性脑梗死大鼠脑组织氮-乙酰天门冬氨酸(NAA)及乳酸(Lac)等代谢产物的影响.方法:采用磁共振波谱技术,分别对缺血、缺血再灌注组及神经节苷脂治疗组鼠脑组织NAA及Lac等代谢产物变化进行观察和比较.结果:在缺血60min再灌注1、3、6 h,神经节苷脂均能有效减少,脑缺血后Lac/磷酸肌酸和肌酸(PCr+Cr)比值的上升和NAA/(PCr+Cr)比值的下降,与缺血再灌组比较差异有显著性(P＜0.01).结论:神经节苷脂具有显著的缺血后脑保护作用,磁共振波谱技术可为神经保护剂的研究提供有价值的影像学信息.

摘要:目的:探讨1,25(OH)2D3对肾组织纤维化的影响及作用机制.方法:雄性6周龄SD大鼠,建立单侧输尿管梗阻模型(UUO),设:①模型组(n=6),行左侧输尿管结扎术;②治疗组(n=6),1,25(OH)2D3溶于无水乙醇中腹腔注射,每100g体重3ng/d;③溶剂对照组(n=6),等容积无水乙醇腹腔注射;④假手术组(n=6).第7天处死各组大鼠,采用光镜和RT-PCR观察肾组织纤维化和核因子(NF)-κB表达的变化.结果:治疗组大鼠肾间质纤维化程度较模型组和溶剂对照组明显减轻.UUO模型第7天时大鼠肾组织NF-κB表达明显增强,采用1,25(OH)2D3治疗后,肾组织NF-KB表达的异常增强能得到有效抑制.结论:1,25(OH)2D3具有阻抑慢性肾脏疾病进行性发展的潜能,而这一作用与其能有效降低肾组织NF-κB表达的异常增强有关.

摘要:目的:构建靶向β分泌酶(β-secretase,BACE)的RNA干扰质粒.方法:用PCR扩增BACE特异性小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA),转入带有增强型绿荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的质粒,再将重组基因片段导入逆转录病毒真核表达载体pLXSN中,通过限制性酶切对该重组质粒进行鉴定.结果:通过限制性内切酶酶切鉴定,成功构建了靶向BACE的RNA干扰质粒pLXSN厄GFP-U6-siBACE结论:pLXSN厄GFP-U6-siBACE质粒的成功构建对利用基因干扰技术治疗阿尔茨海默病的研究奠定了重要的实验基础.

摘要:目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)左心室肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达以及咪哒普利、厄贝沙坦的影响.方法:选用13周龄的SHR 30只,随机分为3组,分别设SHR组、厄贝沙坦组和咪哒普利组.另选同源同系WKY大鼠10只,作为正常对照组.观察指标:血压、左室重量/体重(LVW/BW)、左室厚度/体重;心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白水平.结果:SHR组血压、LVW/BW与左室厚度/体重均增高,心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达明显增加;咪哒普利组、厄贝沙坦组血压均比SHR组低,心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达降低,咪哒普利组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达降低更明显.结论:咪哒普利、厄贝沙坦可以良好地控制血压、降低LVW/BW、左室厚度/体重以及SHR左心室肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达;二者都有抗心肌纤维化作用,因而都可以逆转SHR心肌的左室肥厚:在抗心肌纤维化方面,咪哒普利的作用优于厄贝沙坦.

摘要:目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员正常供者外周血造血干细胞的效果、影响因素及不良反应.方法:对20例造血干细胞正常供者采用中位剂量G-CSF 10.9μg/(kg·d)皮下注射3～5天后,使用COBE Spectra血细胞分离机采集外周血干细胞.采用流式细胞仪检测采集物中CD34+细胞数.结果:第一次采集的单个核细胞(MNC,个)及CD34+细胞量(个)分别为(1.12～13.06,中位数3.10)×108/kg供者体重及(1.14～10.42,中位数3.8)×106/kg供者体重.MNC及CD34+细胞采集总量分别为(2.21～13.60,中位数5.80)×108/kg受者体重及(2.30～14.00,中位数6.40)×106/kg受者体重,均达到移植要求.男性CD34+细胞总量显著高于女性.不良反应较为轻微.供者年龄、体重、G-CSF剂量、采集前白细胞数等与采集所得MNC及CD34+细胞量无明显相关性.结论:G-CSF作为正常供者动员剂安全有效.

摘要:目的:观察川芎嗪对哮喘大鼠模型气道壁嗜酸性粒细胞(EOS)浸润、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量的影响.方法:32只SD大鼠随机分成正常对照组、哮喘模型组和大、小剂量川芎嗪干预组,以卵蛋白致敏,并长期吸入激发诱喘制备大鼠哮喘模型,干预组每次雾化吸入前腹腔注射川芎嗪(分别为80 mg/kg和40 mg/kg),模型组以生理盐水代替.肺组织石蜡切片行TGF-β1免疫组化染色,并经计算机图像分析测定其含量,同时HE染色计数气道壁嗜酸性粒细胞(EOS)数.结果:模型组气道壁EOS计数及TGF-β1含量均高于正常对照组(P均＜0.001);两种剂量川芎嗪干预组EOS计数均低于模型组(P＜0.01,P＜0.05),但大小剂量组间无差别(P＞0.05);干预组TGF-β1含量均显著低于模型组(P均＜0.001),大、小剂量组间差异有显著性(P＜0.01);TGF-β1的表达与EOS计数呈显著正相关(rs=0.7180,P＜0.01).结论:川芎嗪可以减少气道壁EOS浸润和TGF-β1的表达,其降低TGF-β1表达的作用可能部分通过抑制EOS浸润而实现.

摘要:目的:研究黄芪对102速殖子感染小鼠肝脏的影响,探讨黄芪对急性弓形虫感染小鼠的保护作用机制.方法:建立102速殖子感染小鼠模型,设黄芪治疗组和对照组.2组小鼠定期分批处死,取血清和肝脏.用荧光定量PCR检测感染后第4、8天小鼠肝脏的虫荷.用赖氏法测定感染后第4、5、6、7天血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平.取感染后第2、4、6、8天肝脏做冷冻切片,黄递酶组织化学染色方法进行iNOS酶组化染色.结果:感染后第4天和第8天肝脏虫荷两组差异无显著性.感染后黄芪组和对照组血清ALT水平持续上升,黄芪组感染后第4天为87.20 U(卡门单位),显著高于对照组(34.44 U,P＜0.05);感染后第8天为172.50U,显著低于对照组(225.69 U,P＜0.05).对照组iNOS表达局限于小叶中央,汇管区浅染.结论:黄芪对急性弓形虫感染小鼠的肝脏功能存在双向调节的作用,可能与其诱导iNOS的作用有关.

摘要:目的:研究年龄、妊娠及4种阴道疾病对阴道pH和阴道乳酸杆菌分布的影响.方法:检测212例不同年龄段正常女性,150例不同孕期妊娠女性,50例念珠菌性阴道炎、细菌性阴道病,26例滴虫性阴道炎,28例老年性阴道炎女性阴道pH和阴道乳酸杆菌分布.结果:在21～60岁的年龄段,随着年龄的增长,阴道平均pH值升高,阴道乳酸杆菌检出率下降;妊娠期阴道pH明显降低(P＜0.01),阴道乳酸杆菌检出率和21～30年龄段组相比无明显差异(P＞0.05);念珠菌性阴道炎,滴虫性阴道炎,细菌性阴道病和老年性阴道炎,阴道乳酸杆菌检出率均低于正常对照组,且阴道乳酸杆菌半定量计数大都集中在+～++范围中,和正常对照组明显不同,其中老年性阴道炎病人阴道pH值最高,细菌性阴道病病人的阴道乳酸杆菌检出率最低.结论:阴道乳酸杆菌在阴道中的分布受年龄、妊娠及阴道疾病的影响.

摘要:目的:比较头孢西丁三相试验和双纸片协同试验检测AmpC酶的可靠性与临床应用.方法:采用头孢西丁三相试验、双纸片协同试验同时对268株革兰阴性杆菌进行AmpC酶检测,将两种检测方法的结果分别与三维试验的结果加以比较.结果:在268株革兰阴性杆菌中,3种方法的AmpC酶的检出率分别为22.0％、16.0％、14.9％.头孢西丁三相试验和双纸片协同试验与三维试验的总符合率分别为92.9％、98.9％.结论:头孢西丁三相试验可以作为AmpC酶的筛选试验.双纸片法协同试验具有操作简便、结果可靠等优点,与三维试验有较高的符合率,可作为AmpC酶检测常规试验.

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摘要:目的:研究10％果糖注射液在手术创伤状况下对缓解高血糖反应的影响,并对其提供热量的有效性及安全性进行评价.方法:57例外科手术后应激患者随机分为两组,试验组(28例)每日给予10％果糖注射液750 ml静脉滴注,连续3日;对照组(29例)每日予以等量10％葡萄糖注射液3日,比较两输注液对机体代谢的影响.结果:对照组输注后血糖水平增高明显[输液后(13.98±7.72)mmol/L、输液前(7.96±5.30)mmol/L];试验组血糖水平较前无明显升高[输液后(6.83±1.17)mmol/L、输液前(6.33±1.40)mmol/L].与对照组相比果糖注射液在输注过程中,血糖水平变化值明显低于葡萄糖注射液[第1天(0.50±1.25)mmol/L:(6.02±8.09)mmol/L,P＜0.01].血胰岛素水平在输注葡萄糖注射液后有近10倍的升高[输液后(75.41±63.13)mU/L、输液前(8.92±6.76)mU/L],输注10％果糖注射液后血胰岛素无明显增加[输液后(17.69±11.64)mU/L、输液前(14.26±19.64)mU/L,P＜0.05],组间差别显著(P＜0.05).结论:外科手术后输注10％果糖可以避免手术后应激高血糖反应,缓解高胰岛素血症.10％果糖注射液是一安全、有效的药物.

摘要:目的:探讨白内障超声乳化联合外路法视网膜复位术的可行性及有效性.方法:视网膜脱离伴有白内障患者13例(13只眼)采用白内障超声乳化联合外路法视网膜复位术.结果:所有手术眼均行白内障超声乳化及巩膜外环扎术,其中7只眼行巩膜外加压术,2只眼行玻璃体腔注入SF6气体,术后观察6个月以上,12只眼视网膜解剖学复位,10只眼矫正视力≥0.2,2只眼矫正视力＜0.2,1只眼视网膜脱离再发.手术中无晶状体后囊膜破裂,术后无角膜水肿等并发症.结论:白内障超声乳化联合外路法视网膜复位术是可行及有效的.

摘要:目的:探讨筋膜下麻醉在眼前节手术中的效果和安全性,以避免因麻醉导致的手术并发症.方法:眼前节手术患者175例分成两组,球筋膜下麻醉组84例和球后麻醉组(对照组)91例.比较两组的麻醉效果及有无严重并发症.结果:筋膜下麻醉在眼前节手术中麻醉效果与球后麻醉相当,筋膜下麻醉与球后麻醉比较,无严重并发症(P＜0.05).结论:球筋膜下麻醉麻药用量少,操作简单,麻醉效果好,安全性高.

摘要:目的:探讨结肠肿瘤并急性肠梗阻的临床治疗和Ⅰ期手术切除,以避免并发症的发生.方法:对38例患者采用手术前短暂的准备和手术中肠道灌洗,把结肠断端提到腹腔外,用生理盐水和甲硝唑联合灌洗,把结肠灌洗干净,Ⅰ期手术切除肿瘤行肠吻合.结果:38例患者均恢复出院,无手术死亡,吻合口瘘1例治愈,切口感染3例,肺部感染2例,尿路感染1例,均控制并发症出院.结论:掌握手术适应证,合理使用术中肠道灌洗,最大限度无菌技术和无瘤技术,提高肿瘤切除率,减轻患者精神负担,提高生存质量,治疗效果满意.

摘要:目的:为进一步提高乳腺导管系统疾病的X线诊断水平,评价乳腺导管造影在乳头溢液患者诊断中的临床价值.方法:回顾性分析360例乳头溢液患者的钼靶X线检查资料,所有病例均经临床检查、钼靶X线平片摄影、乳腺导管造影及病理学检查确诊.结果:肿瘤性疾病占46.39％(167/360例),其中导管内乳头状瘤最多见,占32.22％.非肿瘤性疾病占53.61％(193/360例),以导管扩张最多见,占26.67％.结论:乳腺导管造影用于诊断乳腺导管系统疾病较为准确可靠,对导管系统疾病的诊断与鉴别诊断很有价值.

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