摘要:目的:研究IMP3在原发性肝细胞肝癌中的表达意义以及基因甲基化同IMP3表达的关系-方法:免疫组化检测162例肝细胞肝癌组织中IMP3的表达-分析临床因素与IMP3表达水平的相关性,并随访所选162例术后患者生存情况作生存分析-提取正常肝组织-肝癌组织的DNA,通过甲基化特异性定量PCR测定IMP3启动子CpG岛甲基化状态-培养正常肝脏细胞L02和Huh-7肝癌细胞,通过Western blot检测IMP3蛋白的表达-提取两组细胞DNA,分别对IMP3基因启动子区域CpG岛进行甲基化状态检测-结果:原发性肝细胞肝癌组织中IMP3阳性率为67.90%;IMP3表达与患者年龄-肿瘤大小-分级-分期-AFP-早期复发均存在相关性;而与性别-HBsAg无明显相关性-随访显示IMP3阳性患者长期生存明显低于IMP3阴性者-CpG岛甲基化检测显示肝癌组织中P1和P2位点高度去甲基化,而正常肝脏组织中P1和P2则处于甲基化状态-正常肝脏细胞IMP3表达阴性,Huh-7肝癌细胞IMP3表达强阳性-正常肝细胞P1和P2位点处于高度甲基化状态,而Huh-7肝癌细胞P1和P2位点处于去甲基化状态-结论:IMP3在原发性肝细胞肝癌中具有高表达,IMP3高表达提示不良预后;基因的甲基化同IMP3的表达存在一定的相关性-

摘要:目的:探讨抑制miR-21表达对非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能的机制-方法:应用Real-time PCR技术分别检测人非小细胞肺癌细胞株A549及其耐药株A549/DDP中miR-21的表达;将miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor) ASO-21转染至A549/DDP中,下调其miR-21的表达,在不同时间点使用MTT检测细胞的增殖,流式细胞仪Annexin-FITC检测细胞凋亡;使用生物信息学和miR的预测软件预测miR-21在非小细胞肺癌中的可能靶点-结果:①miR-21在A549/DDP细胞株的表达均为A549的3倍;②A549/DDP细胞株中转染ASO-21孵育,加入顺铂后,与对照组相比,其凋亡增加,增殖能力明显降低;③生物信息学软件分析后发现miR-21在非小细胞肺癌A549有多个调节靶点,一些蛋白分子可以调节miR-21的表达,组成肿瘤细胞的调节网络而影响肺癌细胞对顺铂的敏感性-结论:抑制miR-21可以促进顺铂耐药细胞A549/DDP的凋亡增加及抑制其增殖,miR-21可能成为逆转肺癌对顺铂耐药的新靶点-

摘要:目的:检测常用肾癌细胞系中HOTAIR的表达情况及建立稳定高表达HOTAIR肾癌细胞株-方法:①q-PCR检测正常肾细胞系(HK-2)和4种肾癌细胞系(os-rc-2,kevt-3,achn和769-p)中HOTAIR的表达;②利用携带HOTAIR基因的慢病毒(pLenti GFP Puro-HOTAIR)感染肾癌细胞系(769-p)后,并采用嘌呤霉素(Puro)抗性筛选方法建立高表达HOTAIR肾癌细胞株-结果:①5种细胞系HOTAIR表达的高低依次是kevt-3-os-rc-2-achn-769-p-HK-2;②慢病毒(pLenti GFP Puro-HOTAIR)转染肾癌细胞系(769-p)后,HOTAIR表达明显升高-结论:①高侵袭性肾癌细胞株(kevt-3-os-rc-2)中HOTAIR的表达明显高于低侵袭性肾癌细胞株(achn-769-p)及正常肾细胞株(HK-2);②成功建立稳定表达的HOTAIR的769-p-HOTAIR细胞系-

摘要:目的:探讨PGE2(prostaglandinE2,PGE2)对子宫内膜癌Ishikawa细胞血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响及其可能涉及的信号转导通路-方法:用PGE2-4种EP受体激动剂(17-phenyltrinor prostaglandin E2-butaprost-sulprostone和prostaglandin E1 alcohol)-EP2受体拮抗剂AH6809-PKA抑制剂H89-腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536处理Ishikawa细胞,通过Western blot实验检测VEGF蛋白表达水平的变化-结果:PGE2明显提高Ishikawa细胞VEGF蛋白的表达水平,10 μmol/L PGE2处理Ishikawa细胞后,VEGF蛋白的表达水平与对照组相比升高31.56%(P < 0.05);10 μmol/L EP1-4受体激动剂处理Ishikawa细胞后,VEGF蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂处理组上升了87.80%(P < 0.05);10 μmol/L EP2受体拮抗剂AH6809处理Ishikawa细胞后,Ishikawa蛋白的表达水平较PGE2处理组下调了45.66%(P < 0.05)-25 μmol/L AC抑制剂SQ22536-10 -滋mol/L PKA抑制剂H89处理Ishikawa细胞后,VEGF蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了29.00%(P < 0.05)和57.50%(P < 0.05)-结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调Ishikawa细胞VEGF蛋白的表达-

摘要:目的:探讨PI3K/Akt信号通路对人肝细胞癌Huh-7细胞乙酰化及糖酵解的影响及机制-方法:体外培养Huh-7细胞株,应用不同浓度的PI3K/Akt抑制剂LY294002与mTOR抑制剂雷帕霉素分别进行干预;乳酸试剂盒法检测乳酸水平;Western blot法检测肿瘤细胞中三磷酸腺苷柠檬酸盐裂解酶(adenosine triphosphate-citrate lyase,ACL)表达水平与乙酰化修饰水平;WST法检测细胞增殖水平-结果:①LY294002干预组的乳酸水平低于DMSO对照组,下降66.15%,细胞内ACL的表达水平下降20.84%,乙酰化水平在多位点表达水平下降(P < 0.01,n = 3);②雷帕霉素干预组的乳酸水平低于DMSO对照组,下降90.16%,细胞内ACL的表达水平下降64.16%,乙酰化水平在多个位点表现出不同水平的下降(P < 0.01,n = 3);③以DMSO干预作为对照,20 mmol/L的LY294002和20 μg/L的雷帕霉素分别作用24 h后,对Huh-7细胞的增殖抑制率分别为24.78%和20.67%(P < 0.01,n = 3)-结论:Huh-7细胞中活化的PI3K/Akt/mTOR信号通路能通过提高ACL的表达,上调细胞内乙酰化的修饰水平,从而增加肿瘤细胞的糖酵解,促进肿瘤细胞的生长-

摘要:目的:研究盐酸埃克替尼和1α,25-二羟基维生素D3单药及联合用药对人肺腺癌A549细胞增殖及表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响-方法:盐酸埃克替尼和1α,25-二羟基维生素D3单药及联合用药处理A549细胞后,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率的变化;用Western blot法及RT-PCR法分别检测细胞EGFR蛋白及EGFR mRNA表达的变化-结果:与单药盐酸埃克替尼组和1α,25-二羟基维生素D3组相比,联合用药组具有更强的细胞增殖抑制作用(P均< 0.05);联合用药组及1α,25-二羟基维生素D3单药组EGFR蛋白及EGFR mRNA表达水平较阴性对照组及盐酸埃克替尼单药组有明显升高(P均< 0.05)-结论:盐酸埃克替尼与1α,25-二羟基维生素D3联合用药对人肺腺癌A549细胞具有协同抗增殖作用;其机制可能与1α,25-二羟基维生素D3升高了EGFR mRNA及EGFR蛋白的表达,从而更有利于盐酸埃克替尼发挥抗肿瘤作用有关-

摘要:目的:研究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IMP3)与胰岛素样生长因子2(IGF2)在乙肝相关性肝癌中的表达,并探讨二者的相关性及与乙肝相关性肝癌临床病理特征的关系-方法:采用免疫组织化学法,检测82例乙肝相关性肝癌组织及对应癌旁组织中IMP3及IGF2的表达;采用实时定量聚合酶链式反应法检测32例冰冻肝癌组织中IMP3及IGF2 mRNA含量;采用蛋白质印迹法检测4例IMP3强阳性染色及4例IMP3阴性染色对应的新鲜冰冻肝癌组织中IMP3及IGF2蛋白含量-结果:IMP3在62.2%肝癌组织中表达,在癌旁组织中不表达-IGF2在59.8%肝癌组织及14.6%癌旁组织中表达-同时,IMP3与IGF2在乙肝相关性肝癌组织中表达密切相关(rn = 0.335,P = 0.002)-另外,IMP3高表达与Edmondson-Steiner 3~4级(P = 0.001)-TNM 3~4期(P = 0.001)-α-甲胎蛋白(AFP)> 200 ng/ml (P = 0.012)及伴有门脉癌栓的肿瘤(P = 0.018)均密切相关;与IMP3表达相似,IGF2高表达亦与Edmondson-Steiner 3~4级(P = 0.001)-TNM 3~4期(P < 0.001)及伴有门脉癌栓的肿瘤(P < 0.001)密切相关-结论:IMP3与IGF2在乙肝相关性肝癌组织中表达密切相关,同时,IMP3与IGF2蛋白分子的检测有助于判断肿瘤恶性分化程度及进展-

摘要:目的:探讨白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)基因单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)与喉癌遗传易感性的关系-方法:通过病例-对照研究设计,以111例经病理确诊的喉癌患者和340例健康对照者为研究对象,选取IL-13基因3’-UTR的SNP位点rs1295685,采用TaqMan探针方法进行多态性检测,应用Logistic回归计算OR值及其95%CI,比较不同基因型与喉癌发病风险的关联-结果:病例组与对照组中rs1295685(IL-13C870T)位点基因型分布存在统计学差异,在调整年龄-吸烟-饮酒及肿瘤家族史因素后发现,与CC基因型相比,携带TT/CT基因型者喉癌发病风险显著增高(调整OR值为2.00,95%CI为1.23~3.27,P值为0.005)-与CC基因型相比,携带TT/CT基因型在年龄≤62岁-吸烟-饮酒-无肿瘤家族史各亚组中表现出更高的喉癌患病风险(OR = 2.72,95%CI:1.40~5.28; OR = 2.07,95%CI:1.19~3.58;OR = 1.96,95%CI:1.03~3.73;OR = 2.01,95%CI:1.18~3.41)-吸烟-饮酒均与TT/CT基因型存在协同作用(OR = 6.48,95%CI:2.77~15.14和OR = 7.35,95%CI:3.15~17.12)-而基因型分布在肿瘤分期-分级中未见显著差异-结论:IL-13基因rs1295685位点的单核苷酸多态性与喉癌遗传易感性有关联-

摘要:目的:探讨壳聚糖纳米包被的结核杆菌早期分泌性抗原(6 kd early secretory antigenic target,ESAT-6) 与fms样酪氨酸激酶3配体 (fms-like tyrosine kinase 3 ligand,FL)重组DNA疫苗接种C57BL/6小鼠对其Th1和Th2型细胞因子生成的影响-方法:制备壳聚糖(nano-chitosan,CS)纳米颗粒,然后用CS纳米粒包被本室构建的结核杆菌ESAT-6与FL重组质粒(nano-ESAT-6-FL)-ESAT-6质粒(nano-ESAT-6)-FL质粒 (nano-FL)和pIRES载体(nano-pIRES),并进行电镜和Western blot鉴定-此后将上述质粒分别接种小鼠,同时给小鼠接种未用壳聚糖纳米颗粒包被的上述对应质粒,并设PBS-CS纳米粒及BCG作为对照-接种后9周,取小鼠脾细胞进行培养,并用结核菌纯化蛋白衍生物 (purified protein derivatives tuberculin,PPD) 给予刺激72 h,然后用ELISA试剂盒检查小鼠脾细胞上清液中的Th1型细胞因子(IFN--酌 -IL-12)和Th2型细胞因子(IL-4-IL-10)的分泌水平-结果:成功制备出壳聚糖纳米包被的结核杆菌ESAT-6和FL重组质粒(包括其他几种质粒),并证实被壳聚糖纳米包被的质粒可在真核细胞中表达-用壳聚糖纳米包被的ESAT-6-FL重组质粒免疫小鼠,其脾细胞上清液中的IFN--酌和IL-12水平显著高于未用壳聚糖纳米包被的相应质粒免疫组和其他对照组,而IL-4和IL-10的水平与未用壳聚糖纳米包被的相应质粒免疫组和其他实验组对照组相比均无明显升高-结论:壳聚糖纳米化的ESAT-6-FL重组质粒疫苗接种小鼠能够显著提高小鼠体内Th1型细胞因子的水平-提示用壳聚糖纳米包被结核杆菌ESAT-6-FL重组DNA疫苗能提高其细胞免疫效果-

摘要:目的:研究环境内分泌干扰物双酚A(BPA)对SD大鼠血-脑屏障成分表达及星形胶质细胞活力的影响并探讨其损伤机制-方法:通过MTT检测细胞活力,高效液相色谱法(HPLC)检测谷氨酸含量的变化,实时荧光定量PCR检测星形胶质细胞中Claudin-3-Claudin-4-Claudin-5-JAM-1-JAM-2-ZO-1-E-cadherin基因的表达-结果:10-7 mg/ml 的BPA与星型胶质细胞孵育24或48 h后即可引起细胞活力的下降,具有统计学差异-在该浓度的暴露下,血-脑屏障紧密连接相关蛋白Claudin-3-Claudin-4-JAM-1-E-cadherin 蛋白的mRNA水平下调,而Claudin-5-JAM-2-ZO-1蛋白基因表达上调且具有统计学意义;HPLC结果显示,谷氨酸的浓度上调-结论:环境内分泌干扰物BPA对血-脑屏障的完整性具有潜在的损伤作用-

摘要:目的:测定一次性经口暴露毒死蜱(chlorpyrifos,CPF)的毒物代谢动力学和毒效学指标,研究CPF的毒代动力学和毒效学特征-方法:雌性SD大鼠按体质量随机分为4个剂量组和1个阴性对照组,每组15只-剂量分组为:12.5-25.0-50.0-100.0 mg/kg,一次性灌胃染毒-染毒后1-3-6-12和24 h 5个时间点分别在每个剂量组随机选择3只大鼠,乙醚麻醉,股动脉取血,颈椎脱臼处死,分离大脑皮质,用高效液相色谱法测定这5个时间点的血清中CPF和3,5,6-三氯-2-吡啶(3,5,6-trichloropyridinol,TCP)的浓度,用胆碱酯酶试剂盒测定血清和大脑皮质中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)活性-结果:血清CPF和TCP的浓度随时间变化,先上升后下降,前者峰值浓度出现在染毒后3 h,后者为6 h左右;血清和皮质的AChE活性随时间变化,先下降后上升,血清AChE活性在染毒后3~6 h抑制程度最大,皮质AChE在染毒后6~12 h抑制程度最大-血清CPF浓度-TCP浓度与AChE活性均成线性负相关,血清CPF浓度与TCP浓度呈线性正相关-结论:获得了毒死蜱经口暴露的多项毒代动力学和毒效学数据,阐明了毒代动力学和毒效学特征,为毒死蜱生理毒物代谢动力学和毒物效应动力学模型的建立和完善提供了科学依据-

摘要:目的:评价米诺环素对老年C57BL/6小鼠术后30 d学习和记忆能力的影响,并探讨星形胶质细胞在此过程中的作用-方法:45只雄性C57BL/6老年小鼠随机分为3组(每组15只):假手术组,仅接受皮肤切开手术;手术组,该组小鼠接受70%肝切除手术但不接受药物治疗;米诺环素组,术后每天腹腔注射45 mg/kg米诺环素,连续30 d,每组15只-利用Morris水迷宫测试其逃避潜伏期和游泳距离以判断小鼠术后学习记忆能力的改变,行为学测试结束后即刻取小鼠海马组织,利用real-time PCR 检测炎性细胞因子TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量,利用Western blot检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙接头蛋白抗体-1(Iba-1)的表达水平,另外取部分海马组织制作冰冻切片样本行免疫组织化学检测-结果:Morris 水迷宫测试显示手术组小鼠逃避潜伏期和游泳距离均延长,显著长于假手术组和米诺环素组(P < 0.05);手术组小鼠海马组织TNF-α mRNA表达水平显著高于假手术组和米诺环素组(P < 0.05),米诺环素组小鼠TNF-α mRNA的表达显著少于手术组(P < 0.05);手术组和米诺环素组小鼠IL-6 mRNA的表达水平显著高于假手术组(P < 0.001),米诺环素组小鼠IL-6 mRNA的表达显著少于手术组(P < 0.001);手术组和米诺环素组GFAP的表达显著高于假手术组(P < 0.001),米诺华素组GFAP的表达水平显著少于手术组(P < 0.001),3组Iba-1的表达水平无差异(P > 0.05);海马组织免疫组化星形胶质细胞的变化与GFAP的变化一致-结论:海马组织星形胶质细胞活化可能与部分肝切除老年小鼠远期学习和记忆能力下降有关,米诺环素可能通过降低TNF-α和IL-6 mRNA的表达,抑制星形胶质细胞的活化改善老年小鼠术后远期学习和记忆能力-

摘要:目的:探讨氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)大鼠腹膜组织形态影响的初步研究-方法:通过SD雄性大鼠(体重180~200 g)腹腔注射4.25%浓度的葡萄糖腹透液的方式模拟腹膜透析-随机分为5个组:①正常对照组;②4.25%腹透液组;③单纯Flu组;④生理盐水组;⑤Flu干预的4.25%腹透液组-4周后留取各组大鼠壁层腹膜组织,光镜观察各组大鼠壁层腹膜形态学的变化,同时采用RT-PCR法测定各组大鼠腹膜转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)mRNA的表达-结果:光镜下HE染色显示4.25%腹透液组大鼠腹膜较正常对照组显著增厚,Flu干预组的壁层腹膜厚度薄于未干预组,生理盐水组和单纯Flu组大鼠腹膜的形态较正常对照组未见明显改变-4.25%腹透液组大鼠腹膜TGF-β1及FN mRNA的表达量均高于正常对照组(均P < 0.05),Flu干预组两者mRNA的表达量均明显低于未干预组(均P < 0.05),生理盐水组和单纯Flu组大鼠腹膜两者的mRNA表达量较正常组无明显统计学意义-结论:长期使用高糖腹透液会改变腹膜的结构,氟伐他汀在一定程度上对腹膜有保护作用,但具体机制仍需进一步研究-

摘要:目的:观察二甲双胍对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells, MCs)核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)-细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响,探讨其肾脏保护机制-方法:体外培养MCs,随机分为正常糖组(NG)-高糖组(HG)及高糖 + 不同浓度二甲双胍组(M1:0.5 mmol/L;M2:1.0 mmol/L;M3:2.0 mmol/L)-培养48 h后收集各组细胞,采用荧光实时定量聚合酶链式反应法(real time-PCR)检测细胞NF-κB mRNA及ICAM-1 mRNA含量,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞NF-κBp65和ICAM-1蛋白表达水平-结果:①MCs可表达NF-κB-ICAM-1;②与NG组比较,HG组MCs NF-κB-ICAM-1mRNA和蛋白表达增强(P < 0.05);③与HG组比较,M3组 MCs NF-κB-ICAM-1mRNA相对表达量明显降低,差异有统计学意义(P < 0.05);④与HG组比较,M1组-M2组和M3组MCs NF-κBp65-ICAM-1蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义(P < 0.01)-结论:二甲双胍可抑制肾小球系膜细胞NF-κB-ICAM-1 mRNA和蛋白表达,并具有一定的浓度依赖性,该作用可能是其肾脏保护机制之一-

摘要:目的:观察国产多孔钽材料的三维孔隙结构以及兔竖脊肌植入后组织形态学特点,对其组织相容性进行评价,为临床骨缺损修复重建提供实验依据-方法:扫描电镜观察国产多孔钽结构;成年新西兰大白兔24只,建立多孔钽兔竖脊肌植入动物模型-将2枚直径1.5 cm-厚0.2 cm圆型多孔钽植入脊柱一侧竖脊肌内(实验组),对侧植入同等数量及体积的多孔钛(对照组)-于术后2-4-8-12 周处死行硬组织切片观察肌肉周围纤维包膜及新生血管形成,并计算小血管生成数量;扫描电镜观察肌肉组织在两种材料内的生长状态-结果:扫描电镜观察多孔钽具有三维立体多孔结构,孔隙直径在400~600 μm;肌肉及纤维组织早期在多孔钽表面及孔隙内生长;晚期胶原纤维延展,相互连接并充满孔隙-硬组织切片显示:随时间的延长多孔钽-肌肉界面形成薄而致密的血管化包膜-孔隙内充满肌肉-纤维组织及小血管-结论:国产多孔钽材料具有良好的组织相容性,其三维结构可使肌肉组织在表面及孔隙内生长及延伸,有可能成为骨缺损修复材料-

摘要:目的:评价多巴胺和去甲肾上腺素对脓毒症休克兔急性肺损伤的保护作用-方法:采用盲肠结扎穿孔(CLP)联合静脉注入内毒素的方法复制脓毒症休克动物模型,将63只新西兰大白兔分为假手术对照组(A组,n = 7)-模型组(B组,n = 14)-多巴胺治疗组(C组,n = 14)-去甲肾上腺素治疗组(D组,n = 14)-多巴胺联合去甲肾上腺素治疗组(E组,n = 14),各组分别于造模后3-6 h处死7只-留取血清标本,用酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各时相点血清中肺泡表面活性蛋白A与肺泡表面活性蛋白D(surfactant protein A and surfactant protein D,SP-A and SP-D)的浓度值,并留取肺组织标本做光镜和电镜检查-结果:各组血清中SP-A与SP-D的浓度值在各时相点均高于A组(P < 0.05);与B组比较,C组血清中SP-A与SP-D的浓度值在3-6 h差异均无统计学意义(P > 0.05);D-E组血清中SP-A与SP-D的浓度值在3-6 h均显著低于B组(P < 0.05)-形态学观察发现D-E组肺组织损伤明显轻于B-C组-结论:脓毒症休克时肺组织损伤严重;单独应用去甲肾上腺素或联合应用去甲肾上腺素和多巴胺可以有效减轻脓毒症休克引起的肺组织损伤,对肺组织起保护作用-

摘要:目的:分离培养SD大鼠退变髓核细胞(degenerative nucleus pulposus cells,dNPCs)-正常髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)及骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),通过Transwell非直接接触体外共培养方法比较dNPCs和NPCs对BMSCs诱导作用-方法:针刺抽吸法制备SD大鼠退变椎间盘动物模型,取正常及已退变的生长良好的第2代NPCs及生长良好的第3代骨BMSCs,将dNPCs 或NPCs等比例与BMSCs分别复合藻酸盐接种于Transwell共培养系统中进行体外非接触共培养(上室接种BMSCs,下室接种dNPCs或NPCs作为dNPCs共培养组和NPCs共培养组)7 d后回收上室BMSCs-单独NPCs和单独BMSCs培养组分别作为阳性和阴性对照-对各组Ⅱ型胶原(collagenⅡ)和多功能蛋白聚糖(aggrecan)行RT-PCR和Western blot检测-结果:collagen Ⅱ和aggrecan的mRNA表达在两共培养组均有较高表达,但NPCs共培养组较dNPCs共培养组更加接近单纯NPCs组,而单纯BMSCs组未见明显表达;collagenⅡ和aggrecan的蛋白表达量在两共培养组中均较高,但NPCs共培养组较dNPCs共培养组更加接近单纯NPCs组,而单纯BMSCs组未见明显表达-结论:在Transwell非直接接触共培养条件下dNPCs和NPCs均能诱导BMSCs向髓核方向分化,并且NPCs对BMSCs向髓核方向分化的诱导作用更加明显-

摘要:目的:获得十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)分泌蛋白2(mAd-ASP-2)编码基因,构建其高效表达的大肠杆菌表达体系-方法:以RT-PCR的方法得到克隆了编码mAd-ASP-2的成熟肽全基因序列,克隆入原核表达载体pET-22b(+)中,组装成表达载体pET-22b-mAd-ASP-2-利用大肠杆菌偏爱密码子和GenScript rare codon analysis 软件获得优化密码子优化的mAd-ASP-2*基因序列并人工合成该基因,将其克隆入原核表达载体pET-22b(+),组装成表达载体pET-22b-mAd-ASP-2*-将这2个表达载体分别转化入大肠杆菌表达菌株Rosetta-gami-2(DE3)中,经IPTG诱导表达-结果:同样条件下,密码子优化的mAd-ASP-2*基因比优化前能够获得较高的表达,且以可溶形式存在-利用His Trap HP亲和柱获得了纯化的重组蛋白mAd-ASP-2*,确定了纯化重组蛋白咪唑洗脱液最佳浓度为200 mmol/L-Western blot分析结果进一步显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag抗体发生特异性结合,说明表达蛋白为目的蛋白-结论:通过密码子优化实现了十二指肠钩虫ASP-2的高效表达,为进一步研究Ad-ASP-2的功能和以其作为血清学诊断抗原或保护性疫苗奠定了基础-

摘要:目的:从生物力学方面比较Tossy Ⅲ型肩锁关节脱位的3种不同固定方式,为临床治疗提供理论依据- 方法:取6具成人尸体标本(12个肩关节),均制成Tossy Ⅲ型肩锁关节脱位模型-将12个肩关节随机分为3组,每组4例,分别进行钛缆内固定-锚钉内固定-锁骨钩钢板内固定-术后用MTS生物材料测试系统对3种内固定标本分离度进行测量-结果:3种内固定方式均能够达到完好的解剖复位-与锁骨钩钩钢板内固定组相比,其余两组关节活动度较大(P < 0.05)),且移位程度较小(P < 0.05)-结论:对于Tossy Ⅲ型肩锁关节脱位,锚钉及钛缆内固定分离度较小,活动度适中,更接近于正常生理状态-

摘要:目的:探讨认知障碍初步评价表(cognitive-12,COG-12)区分中-重度度阿尔茨海默病(Alzheime’s disease,AD)的能力-方法:61例中度和55例重度阿尔茨海默病患者为研究对象,对所有对象进行COG-12-AD8-MMSE及CDR测试-结果:重度AD患者COG-12-AD8-MMSE总分明显高于中度AD-多元回归分析提示COG-12评分不受被试者年龄及受教育年限的影响-COG-12能有效区分中-重度AD,敏感度为90.9%,特异度为70.5%-结论:COG-12对中-重度AD具有较好的区分能力-

摘要:目的:探讨首发抑郁症患者西酞普兰治疗前后血清神经肽与细胞因子水平的变化-方法:采用放射免疫分析法检测50例首发未用药抑郁症患者西酞普兰治疗前后和40例健康对照组血清神经肽[神经肽Y(NPY)-β-内啡肽(β-EP)-胃动素(MTL)]和细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)-胰岛素生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)]水平,用汉密尔顿抑郁量表(HAMD-17)-汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评估情感症状和疗效,并进行统计分析-结果:首发抑郁症患者治疗前血清β-EP(340.31 ± 94.97)pg/ml-TNF-α(14.64 ± 9.23)ng/ml和IGF-II(0.80 ± 0.30)ng/ml水平较对照组均显著增高(均P < 0.05),血清NPY(96.41 ± 32.98)pg/ml水平显著低于对照组(P < 0.05),药物治疗后IGF-II降低(P < 0.05),NPY增加(P < 0.05)-回归分析发现NPY是抑郁症的独立影响因素(P = 0.012),MTL治疗前后的差值与药物疗效相关(P = 0.016)-结论:首发抑郁症患者神经肽和细胞因子存在异常,低水平NPY可能是抑郁症的特征性指标,MTL水平上升可能预测疗效-

摘要:目的:探讨NT-proBNP测定在急性肺血栓栓塞症溶栓治疗中的意义-方法:将62例血流动力学稳定的次大面积肺血栓栓塞症患者分为溶栓组与非溶栓组,比较两组间治疗前后临床表现-生命体征及预后的差异,并进一步以外周血NT-proBNP是否增高分组,比较组间上述统计指标的差异-结果:溶栓组与非溶栓组相比,治疗前后心率-收缩压-呼吸频率-D-Dimer-PaO2变化的差异不明显,胸闷症状改善率及临床不良事件发生率两组间无显著差别-NT-proBNP增高的患者溶栓组心率-收缩压-呼吸频率-D-Dimer-PaO2的改善显著优于非溶栓组,胸闷改善率及临床不良事件率均优于非溶栓组;NT-proBNP正常的患者溶栓组与非溶栓组相比,上述指标差异不明显-非溶栓治疗的患者中,NT-proBNP正常的患者心率-收缩压-PaO2的改善优于NT-proBNP增高的患者,不良事件发生率显著低于NT-proBNP增高的患者;而溶栓治疗的患者,NT-proBNP增高组与NT-proBNP正常组上述指标无显著差异-结论:溶栓治疗可以改善NT-proBNP增高的次大面积肺栓塞患者的预后,但对NT-proBNP正常的患者预后改善不明显-

摘要:目的:探讨微创体外循环(minimal extracorporeal circulation,MECC)心内直视二尖瓣手术的疗效-方法:90例二尖瓣病变需行二尖瓣置换(MVR)或二尖瓣成型(MVP)手术的患者随机分成两组-MECC组(A组)45例,手术采用右胸前外侧小切口,经股动脉-股静脉和上腔静脉插管,建立MECC,术中应用负压辅助静脉引流装置;常规组(B组)45例,采用正中纵劈胸骨,经升主动脉,上-下腔静脉插管建立体外循环-观察并记录两组体外循环(CPB)时间(min),主动脉阻断时间(min),术中出血量(ml),输血量(ml),尿量(ml),24 h胸腔引流量(ml),术后辅助呼吸时间(h),ICU停留时间(h),住院总费用(万元)和手术后并发症发生情况-结果:两组均无手术死亡-A组CPB时间-主动脉阻断时间明显长于B组(P < 0.05);但A组术中失血量-围手术期输血量均明显少于B组(P < 0.01);手术后24小时总引流量A组显著较B组少(P < 0.01);A组术后呼吸机辅助时间-ICU停留时间均明显短于B组(P < 0.01),A组住院期间的总费用也少于B组(P < 0.01)-结论:MECC辅助下的MVR虽然增加了CPB时间-主动脉阻断时间,但创伤小-出血少-恢复快,切口美观,费用低,安全可靠,可能是未来心脏手术的发展趋势-

摘要:目的:探讨内镜联合X线置放金属支架后择期手术与急诊外科手术相比,两者治疗可切除性结直肠恶性梗阻的临床价值及安全性-方法:回顾性分析2001年5月~2012年10月本院94例结直肠恶性梗阻患者的临床资料-其中30例经内镜联合X线临时置入金属支架,择期行手术治疗;64例行急诊手术治疗-比较支架组与急诊手术组的一期切除吻合率-手术时间-术后通气时间-住院时间-并发症发生率及住院期间病死率等指标并观察支架置入操作成功率-临床缓解率-并发症发生率及置入后接受剖腹手术和腹腔镜手术情况-结果:①支架组一期切除吻合率明显高于急诊手术组(96.67% vs 53.13%,P < 0.001)-支架组术后并发症明显低于急诊手术组(6.67% vs 25.00%,P < 0.05)-支架组住院期间病死率与急诊手术组相比,无统计学差异(P > 0.05)-支架组手术时间-术后通气时间分别为(156.13 ± 49.79)min,(3.60 ± 1.40)d,明显低于急诊手术组-支架组住院时间与急诊手术组相比,无统计学差异(P > 0.05);②支架组中30例放置金属支架,操作成功率100%(30/30),临床缓解率96.67%(29/30),并发症发生率6.67%(2/30),支架置入后平均(8.9 ± 1.0)d行择期手术-支架组接受腹腔镜手术的患者明显多于急诊手术组(P < 0.01)-支架组中剖腹手术的手术时间短于微创腹腔镜术(P < 0.05),剖腹术后并发症明显低于微创腹腔镜术(P < 0.05),但剖腹术患者的住院时间明显长于腹腔镜术的患者(P < 0.05)-结论:内镜联合X线置放金属支架可迅速-有效缓解结直肠恶性梗阻症状-经支架置入后择期手术与急诊手术相比安全性高,且增加一期切除吻合率,并减少并发症,可作为缓解结直肠恶性梗阻的一项有效治疗方法-剖腹手术仍是结直肠恶性梗阻支架置入后的主要手术方式-通过支架置入,可使部分患者获得微创手术机会-

摘要:目的:研究肠病性肢端皮炎(acrodermatitis enteropathica,AE)患者SLC39A4基因突变情况,为完善该病的基因诊断与遗传咨询提供分子生物学依据-方法:提取AE家系成员(包括1例男性AE患者及其双亲)和100例正常对照外周血白细胞基因组DNA,PCR扩增SLC39A4基因的全部外显子并行DNA测序-结果:检测到患者SLC39A4基因中第5号外显子c.831G>A和第10号外显子c.1617delA,前者导致编码蛋白密码子277位ATG变为ATA,编码的蛋氨酸Methionine M变为异亮氨酸Isoleucine I,后者导致cDNA1617位A丢失,移码突变-患者的父亲和母亲分别携带c.831G>A和c.1617delA基因突变,与家系无血缘关系的100名正常对照均未发现此突变-结论:SLC39A4基因c.831G>A 和 c.1617delA突变是导致该例患者AE的特异突变-

摘要:目的:探讨1种相对便捷-准确-经济的适用于杂合型SNP位点的无创性产前检测胎儿唐氏综合征的方法-方法:选择50例孕整倍体胎儿(孕15~21周)-13例孕21三体胎儿(孕19~26周)的母血浆样本,应用Multiple-SNaPshot法检测胎盘源性PLAC4基因上5个SNP等位基因的基因比率及其杂合性,从而对杂合型SNP位点的胎儿无创性产前检测唐氏综合征;同时对我国苏南地区200例人群的5个SNP位点进行基因型别研究-结果:从63例单胎孕妇外周血中成功提取到PLAC4 mRNA,检测出17例PLAC4上为杂合型SNP的样本,通过分析SNP等位基因比率检测出14例正常整倍体胎儿及3例21三体胎儿-苏南地区人群PLAC4上Rs8130833和Rs4818219位点的杂合度分别为0.278和0.343-结论:对PLAC4基因上为杂合型SNP位点的胎儿,用Multiple-SNaPshot法检测其等位基因比率可用于无创性产前筛查唐氏综合征-苏南地区人群PLAC4基因上SNP杂合度较高的位点有Rs8130833和Rs4818219-

摘要:目的:探讨食管癌合并胃间质瘤(esophageal cancer complicated with gastric stromal tumor,ECGST)患者的临床病理特点及生存分析-方法:回顾性分析本院自2009年5月~2013年3月确诊的14例ECGST患者的临床病理资料,并对患者生存进行随访-结果:ECGST的发生率约为0.54%-患者主要以食管癌的临床表现而就诊,术前普通内镜-CT检查对胃间质瘤的漏诊率均为100%-14例均在术中发现胃间质瘤病灶结节-14例食管癌病灶大小平均为2.84 cm(0.5~6.0 cm),胃间质瘤的病灶大小平均为0.69 cm(0.4~1.8 cm),每例患者的间质瘤病灶大小均小于相应的食管癌病灶大小-食管癌TNM分期为0期2例-Ⅰ期2例-Ⅱ期6例-Ⅲ期4 例,胃间质瘤的TNM分期均为IA期;分期晚于相应的胃间质瘤TNM分期-12例胃间质瘤为极低度危险性,其余2例为低度危险性-术后随访时间9~41个月,除1例患者死亡外,余下13例存活-结论:ECGST并非罕见,ECGST患者术前胃间质瘤易漏诊-ECGST合并的胃间质瘤,相对于对应的食管癌,存在肿瘤大小较小-TNM分期早等特点-

摘要:目的:研究儿童体检中幼女小阴唇粘连的发生情况及相关的卫生习惯-方法:随机抽取3 000例1~36月龄的幼女,调查小阴唇粘连的检出率,及幼儿的外阴清洁方式-结果:幼女小阴唇粘连检出率:1~6月龄:3.49%;7~12月龄:5.28%;13~24月龄:1.97%;25~36月龄:1.70%,各年龄组间差异有显著性(χ2 = 15.214,P = 0.002)-各季度幼女小阴唇粘连的检出率,第一季度最高:4.49%;第三季度最低:2.14%,差异有显著性(χ2 = 6.339,P = 0.012)-多数家长没有给幼儿采用正确的外阴清洁方式,小阴唇粘连患儿的错误外阴清洁方式发生率明显高于非患病组,差异有显著性(χ2 = 5.579,P = 0.018)-结论:幼女小阴唇粘连在儿童体检门诊中有较高的检出率,应给予重视,及时发现,转诊;家长的相关卫生知识和行为有较大偏差,应加强此方面的宣教-

摘要:目的:探讨轻度胃肠炎伴良性婴幼儿惊厥(BICE)的临床特点和预后-方法:对本院2009年1月~2011年6月因急性胃肠炎合并无热惊厥住院并诊断为BICE的患儿进行临床分析并进行2年以上随访-结果:26例患儿发病月龄8~38个月,冬季发病18例,惊厥发作形式表现为全身强直阵挛发23例,持续时间不超过 5 min,1次病程中惊厥> 2次3例-粪便轮状病毒检测阳性19例,血生化-头颅CT及发作间期脑电图检查正常,惊厥停止后未行抗癫痫治疗-随访26例,2例复发,随访期间患儿精神运动发育正常-结论:BICE发病年龄多为12~24月龄,冬季多发,轮状病毒为主要病原,预后良好,无需长期使用抗癫痫药物治疗-

摘要:目的:建立测定人尿液中索法酮浓度的LC-MS/MS方法,用于研究健康受试者口服索法酮后药物在体内的尿药排泄特征-方法:尿液经甲醇处理后,进行LC-MS/MS分析-色谱柱为Poroshell 120 SB-C18柱,柱温为30℃-流动相为甲醇∶2 mmol/L 醋酸铵(85∶15),流速为0.20 ml/min-负离子模式下使用电喷雾离子化和多反应离子监测-2名健康志愿者单次口服索法酮胶囊200 mg后,测定尿药浓度并研究尿药排泄特征-结果:索法酮的最低定量限为1 ng/ml,在1~500 ng/ml范围内线性关系良好,高中低3个浓度的批内-批间差均小于6%,基质效应在93.1%~114.8%范围内,提取回收率为84.7%~93.6%-尿液中索法酮的累积排泄率小于0.01%-结论:所建立的LC-MS/MS分析方法能快速-准确地测定尿液中索法酮的浓度-

摘要:目的:建立静脉注射丹参酮ⅡA磺酸钠与心血管药物配伍后不溶性微粒检测的方法并且确立药物之间是否存在配伍禁忌-方法:参阅相关文献及对本院HIS系统的住院患者医嘱中与丹参酮ⅡA配伍的心血管药物品种以及混合配制情况进行综合归纳-按临床操作规程配置输液,采用光阻法用GWF-8JA 激光微粒分析仪对不溶性微粒进行测定-结果:测定了不同配伍输液和药物的不溶性微粒,各配伍液中≥25 μm-≥10 μm的不溶性微粒均有增加,不同直径的不溶性微粒增加的程度有别-结论:丹参酮ⅡA磺酸钠与复方氯化钠-优泌林R以及2种及2种以上等注射剂大多数存在配伍禁忌即微粒增加幅度较大超过2010版《中华人民共和国药典》标准,在临床使用中应给予重视-

摘要:目的:探讨冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)3种不同的内膜准备方法对临床结局的影响-方法:回顾性分析2010年4月~2012年3月在本中心进行的冻融胚胎移植共287个周期,其中自然周期组184例,激素替代周期组57例,促排卵周期组46例-比较周期妊娠率-流产率-种植率-多胎妊娠率等指标-结果:3组的临床妊娠率分别为37.5%-38.6%-47.8%,流产率分别为8.7%-27.3%-18.2%,种植率分别为18.6%-21.8%-28.6%-促排卵周期组的临床妊娠率高于自然周期组及激素替代组,但差异无统计学意义(P > 0.05)-但相较于自然周期组,促排卵周期组的种植率显著增加(P < 0.05)-移植1-2-3枚胚胎的临床妊娠率和多胎率分别是27.8%-36.9%-43.9%和 0%-6.8%-14.2%-随着移植数目的增加,临床妊娠率有增加趋势-移植3枚胚胎的多胎率较移植1枚胚胎显著增加(P < 0.05)-结论:在冻融胚胎移植周期中,3种内膜准备的妊娠率-流产率无明显差异,但促排卵周期组的种植率较高-增加移植胚胎数目在提高妊娠率的同时,显著增加多胎率-

摘要:目的:评估国产和进口的两种胎儿纤维连接蛋白(fetal fibronectin,fFN)检测试剂盒在早产快速诊断的一致性-方法:招募前来产科就诊的18~40岁-孕周在22~35周的孕妇245例,对其宫颈阴道分泌物分别予以两种fFN试剂盒检测-结果:以进口试剂盒作为标准,国产试剂盒的灵敏度为97.37%,特异度为96.45%,阳性预测值为92.50%,阴性预测值为98.79%,两者的Kappa一致性检验为Kappa = 0.924 (P < 0.001)-结论:进口与国产的fFN检测试剂盒在诊断早产方面具有高度一致性;国产fFN检测试剂盒适用于临床上进行早产诊断-