2024(10):1323-1336,1434.DOI: 10.7655/NYDXBNSN240634
摘要:目的：研究S100A4核定位在胰腺癌（pancreatic cancer，PC）转移中的作用与机制。方法：利用PC病程进展的组织芯片，通过免疫组化和HALO数字病理精准分析平台等技术，定量S100A4在组织细胞，特别是胞核中的表达情况，统计分析各检测指标与临床参数及生存期之间的关系。通过分子结构信息学分析、质粒构建与转染以构建基因调控的不同分组细胞研究模型；利用核质蛋白分离、免疫共沉淀、Western blot、划痕实验、Transwell实验、靶向剪切及转座酶技术（cleavage under targets and tagmentation，CUT&Tag）等研究S100A4核定位在PC转移中的作用与机制。结果：S100A4的高表达及其核定位与PC的T、N分期和不良预后正相关。PC细胞中S100A4核定位受小泛素相关修饰物（small ubiquitin-related modifier，SUMO）修饰调控，泛素结合酶9介导了PC细胞中S100A4的K22和K96位点与SUMO1结合，并通过SUMO 特异性蛋白酶1实现去SUMO化，动态平衡 PC细胞中S100A4的SUMO化修饰水平；调控S100A4蛋白的SUMO化修饰可改变PC细胞的体外转移能力；CUT&Tag测序结果证明S100A4核定位参与调控与肿瘤转移功能相关的基因网络。结论：S100A4核定位可提示PC预后不良，有望成为临床治疗方案制定的重要依据。发现阻断或抑制S100A4核定位的办法，可能成为抑制PC转移，特别是早期转移，改善PC患者预后的新靶点。
2022, 42(8):1119-1124.DOI: 10.7655/NYDXBNS20220811
摘要:目的：建立一种基于 CRISPR/Cas13a 的 TP53 R248W 变异体的快速检测技术。方法：根据 Over⁃lap PCR 技术，以 TP53野生型质粒为模板构建TP53 R248W变异体质粒；对TP53R248W变异体扩增产物大小，扩增反应条件及crRNA长度和浓度进行优化，初步建立基于CRISPR/Cas13a的R248W变异体快速检测方法；利用不同突变率TP53 R248W变异体及模拟血浆 ctDNA，评价 CRISPR/Cas13a 方法的检测灵敏度。结果：建立的 CRISPR/Cas13a 方法成功检测出产物大小为 368 bp 的 TP53 R248W片段；在0.05~0.25 μmol/L浓度范围内，crRNA浓度越高，检测结果相对荧光值越高；该方法检测TP53 R248W变异体的灵敏度为1×104 拷贝/μL，最低可以检测出突变率为0.01%的变异体。结论：建立的CRISPR/Cas13a方法具有快速、简便、灵敏、 特异等优点，为组织和血浆中的TP53 R248W变异体的检测提供了新的技术手段。
2021(3):355-360.DOI: 10.7655/NYDXBNS20210308
摘要:目的：对比研究用于检测免疫效应细胞增殖与细胞毒功能的方法。方法：分别采用CCK-8法、EdU标记法、CFSE标记法检测不同培养条件下NK92细胞增殖［组1：100 U/mL白细胞介素（interleukin，IL）-2；组2：100 U/mL IL-2+10 U/mL IL-15］。用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）释放法、活细胞染料双标流式法、荧光素酶法检测两组NK92对K562细胞的杀伤。结果：CCK-8法检测结果提示组2增殖能力强于组1，但差异无统计学意义（P＞0.05），而EdU和CFSE标记法均提示两组间增殖能力有显著差异（P＜0.05）。活细胞染料双标流式法与荧光素酶法均能够检测出不同效靶比下两组NK92细胞毒功能的差异（P＜0.05），LDH释放法在低效靶比下未检测出两组细胞毒性的差异（P＞0.05）。以双标流式法的检测值为标准参照，荧光素酶法和LDH释放法的检测值与其呈显著相关性（rS=0.979 4，P＜0.001；rS=0.973 2，P＜0.001）。结论：CCK-8法更侧重于检测代谢活性，EdU和CFSE标记法更适用于悬浮类免疫细胞的增殖检测。3种细胞毒功能检测具有一致性，活细胞染料双标流式法适合检测对悬浮类靶细胞的杀伤，荧光素酶法比LDH释放法更适用于检测对贴壁细胞的杀伤作用。