2024(5):615-625.
DOI: 10.7655/NYDXBNSN231186
摘要:
目的：研究热休克蛋白A12A（heat shock protein A12A，HSPA12A）对内毒素血症肝损伤的影响及机制。方法：①采用脓毒症小鼠肝组织RNA测序的公共数据库，以生物信息学手段分析Hspa12a和多种载脂蛋白的mRNA表达变化。②采用 6~8周龄Hspa12a基因敲除（Hspa12a knockout，Hspa12a-/-）鼠和野生型（wild type，WT）鼠，腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）5 mg/kg诱导内毒素血症，以生理盐水（normal saline，NS）注射小鼠为对照组，分为NS-WT组、NS-Hspa12a-/-组、LPS-WT组和LPS-Hspa12a-/-组；LPS作用6 h后，收集肝组织，HE染色观察肝脏组织病理变化；免疫印迹和RT-PCR分析其中HSPA12A、 ApoA1、ApoB、ApoM表达水平；分离血清，测定肝功能标志物丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）水平以及高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平。③WT鼠原代肝细胞过表达Hspa12a后，使用LPS（500 ng/mL）作用于肝细胞模拟内毒素血症肝损伤模型，6 h后检测肝细胞培养上清的ALT和AST水平。④根据是否发生脓毒症肝损伤将患者分为脓毒症肝损伤组和对照组，比较两组患者ALT、AST、HDL-C和LDL-C的差异。结果：①生物信息学分析显示，脓毒症小鼠肝脏Hspa12a、Apoa1、Apob和Apom的mRNA表达下降。②与NS-WT组相比，LPS-WT组肝组织出现明显损伤（P < 0.001）、炎症病灶数量增多（P < 0.01）、血清 ALT（P < 0.05）和 AST（P < 0.01）升高，同时肝组织中 HSPA12A 表达显著下降（P < 0.05）；而与 LPS-WT组相比，LPS-Hspa12a-/-组肝脏病理变化更严重（P < 0.05）且血清ALT（P < 0.01）和AST（P < 0.05）水平升高，HDL-C和 LDL-C水平下降（P < 0.01），肝组织载脂蛋白（ApoA1、ApoB、ApoM）表达降低（P < 0.05，P < 0.01）。③体外实验中LPS作用使肝细胞培养上清中ALT和AST水平升高（P < 0.001），而过表达Hspa12a能够减轻LPS作用引起的ALT和AST水平升高（P < 0.01）。 ④临床数据显示，出现脓毒症肝损伤的患者血浆中ALT和AST水平相比对照组显著升高（P < 0.001），HDL-C和LDL-C水平显著下降（P < 0.001）。结论：内毒素血症导致肝脏HSPA12A表达下调，其介导了内毒素血症肝损伤的发生，过表达Hspa12a能够保护内毒素血症引起的肝损伤，该作用可能与维持肝脏载脂蛋白及脂蛋白稳态有关。
