文章摘要
徐江英,许琳,戴荣,华超,卢是月,彭光勇.人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达[J].南京医科大学学报,2003,23(2):
人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达
Cloning of Human Thioredoxin Reductase cDNA and Its Expression in E.coli
  
DOI:10.7655
中文关键词: 硫氧还蛋白还原酶、序列分析、原核表达、人类
英文关键词: 
基金项目:
徐江英  许琳  戴荣  华超  卢是月  彭光勇
南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京军医学院生物基因工程研究中心,江苏,南京,210099;南京医科大学微生物与免疫学教研室,江苏,南京,210029;
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中文摘要:
      目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白.方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR.异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白.结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99%;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36%,其分子质量为55 ku.TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF2080 1 8.结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础.
英文摘要:
      
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