文章摘要
李凌云,许正平.血管生成素与绿色荧光蛋白融合蛋白的表达及纯化[J].南京医科大学学报,2005,25(7):
血管生成素与绿色荧光蛋白融合蛋白的表达及纯化
Expression and purification of angiogenin-EGFP fusion protein in E.coli
  
DOI:10.7655
中文关键词: 血管生成素、增强型绿色荧光蛋白、免疫印迹分析、金属螯合亲和层析、融合表达
英文关键词: 
基金项目:
李凌云  许正平
南京医科大学细胞生物学与医学遗传学系,江苏,南京,210029;浙江大学医学院公共卫生系,浙江,杭州,310031
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中文摘要:
      目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能.方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS-ANG-EGFP.该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用金属螯合亲和层析纯化目的蛋白.激光共聚焦显微镜和Westernblot鉴定融合蛋白的表达情况.结果:重组蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并从破菌上清中一步纯化目的蛋白,纯度可达95%以上.Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原性和特异性.诱导表达的菌体在激光共聚焦显微镜下可发射明亮的绿色荧光.结论:成功的表达并纯化了ANG-EGFP融合蛋白,利用EGFP的荧光示踪作用,该融合蛋白可用于血管生成素核转位和胞内共定位蛋白质研究.
英文摘要:
      
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