目的:构建小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体.方法:利用RT-PCR方法,从Balb/C小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA,经测序证实后插入Pzac2.1质粒,用磷酸钙沉淀法,与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒,并通过抽提病毒DNA进行PCR扩增鉴定重组病毒的形成,设立eGFP基因为对照.结果:1592 bp的小鼠T-bet基因被成功克隆,分析表明,与Genbank中发表的序列相比具有99.8％的同源性.重组质粒Pzac2.1-T-bet的PCR及酶切鉴定表明T-bet基因被定向插入,与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞包装成病毒后,经荧光显微镜和病毒DNA的PCR检测,证实已完成对重组病毒的包装.结论:成功构建了小鼠T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV-T-bet,为免疫紊乱性疾病的T-bet基因干预治疗奠定了基础.
王锁英,许化溪,王胜军,黄新祥,王文斌,陈巧林,马斌,眭建,姜旭淦,胡嘉波,WANG Suo-ying, XU Hua-xi, WANG Sheng-jun, HUANG Xin-xiang, WANG Wen-bin, CHEN Qiao-lin, MA Bin, SUI Jian, JIANG Xu-gan, HU Jia-bo.小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因腺相关病毒载体的构建[J].南京医科大学学报（自然科学版）,2006,26(3):
