目的:明确内耳干细胞的取材、培养方法及鉴定方法,观察内耳干细胞的形态.方法:取前庭椭圆囊处上皮;大鼠内耳内螺旋沟;内耳的Corti器位置;利用无血清培养和单细胞克隆技术,进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,并用Nestin、Brdu免疫荧光方法,鉴定内耳干细胞.同时进行细胞计数.结果:从新生大鼠内耳分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化,悬浮生长的Nestin阳性细胞团,并具有增殖的能力,免疫荧光实验可表达Brdu阳性.其中内耳的Corti器位置取材组Nestin阳性细胞团的直径和其他两组存在统计学差异.而打散后的细胞团中Brdu阳性细胞数量较多,是内耳干细胞的最佳取材位置.结论:从新生大鼠前庭椭圆囊处上皮、大鼠内耳内螺旋沟、内耳的Corti器位置可分离出内耳干细胞,其中内耳的Corti器是内耳干细胞的最佳取材位置.