摘要:目的:构建人HCCR蛋白表达载体,并探讨其体外表达及表达产物的纯化.方法:培养人肝癌细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pMBP-C,转化到大肠杆菌Top10F'中,进行诱导表达.表达产物通过Ni-NTA螯合层析进行纯化.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,Western blot和电喷雾电离串联飞行时间质谱(ESI-TOF MS)鉴定表达产物.结果:构建的表达载体经限制性内切酶酶切分析和DNA测序,证明所构建的质粒含有HCCR基因.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白,这种蛋白不存在于诱导后的空载体表达产物中,表达产物经Western blot和蛋白质谱鉴定含有HCCR蛋白的部分肽段.结论:成功构建了HCCR蛋白表达载体并进行体外表达及纯化.