文章摘要
王小英,林 红,张慧林,仇金荣,丁贵鹏,唐小军,陈汐敏,唐 甜,刘琼琼,冯振卿,朱 进.人源抗Trop-2抗体Fab的制备及条件优化[J].南京医科大学学报,2012,(1):35~39
人源抗Trop-2抗体Fab的制备及条件优化
Preparation and optimization of human anti-Trop-2 antibody fragment Fab
投稿时间:2011-10-24  
DOI:10.7655
中文关键词: 人源抗Trop-2抗体片段  原核表达  免疫学检测
英文关键词: human anti-Trop-2 antibody fragment  prokaryotic expression  immunology detection
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81101704);南京市医学科技发展重点项目(ZKX09015)
作者单位
王小英 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029 
林 红 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029/江苏省血液中心,江苏 南京 210042 
张慧林 南京医科大学附属南京妇幼保健院,江苏 南京 210029 
仇金荣 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029 
丁贵鹏 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029 
唐小军 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029 
陈汐敏 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029 
唐 甜 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029 
刘琼琼 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029 
冯振卿 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029 
朱 进 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 210029/南京军区军事医学研究所,江苏 南京 210002 
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中文摘要:
      目的:探讨人源抗Trop-2抗体片段Fab在大肠杆菌中的诱导表达,优化蛋白表达及纯化的条件?方法:将含有抗Trop-2 Fab 抗体基因的质粒转化宿主菌E.coli TOP10F ′大肠杆菌,比较诱导前培养液更换对抗Trop-2 Fab片段表达量的影响;比较不同诱导温度?诱导时间及诱导前加入葡萄糖对蛋白表达的影响;大量表达的抗Trop-2 Fab经亲和层析纯化后,用免疫荧光和流式细胞术检测其免疫学特性?结果:在培养液中加入5 g/L的葡萄糖,人源抗Trop-2抗体Fab片段的表达产量明显增加;16℃的诱导温度比其它温度能表达更多的Fab分子;加诱导剂12 h,目的蛋白的表达量至峰值?结论:本实验结果为在原核系统中大量制备抗Trop-2抗体片段及后续的肿瘤靶向治疗提供了基础?
英文摘要:
      Objective: To explore the induced expression of human anti-Trop-2 antibody fragment Fab in E.coli TOP10F ′ and to optimize the expression and purification conditions of protein. Methods: The plasmid containing anti-Trop-2 Fab antibody gene was transformed into E.coli TOP10F ′. It was tested to replace the culture medium before induction of anti-Trop-2 Fab expression. The effects were compared in different induction temperatures,induction times and glucose added before induction on protein expression. Anti-Trop-2 Fab was purified by affinity chromatography and its immunological characteristics were evaluated by immunofluorescence and flow cytometry. Results: In the culture medium by adding 5 g/L of glucose,the expression of anti-Trop-2 Fab significantly increased. The temperature of 16℃ can induce more expression of Fab than other temperatures. The expression of anti-Trop-2 Fab reached peak after adding inducer for 12 hours. Conclusion: This study provides the basis of large-scale preparations of anti-Trop-2 Fab in prokaryotic expression system and subsequent utilization of anti-Trop-2 Fab in tumor targeted therapy.
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