文章摘要
俞 静,孙 丽,孙晓仙,陈志红,钱 晖,许文荣,朱 伟.应用CRISPR/Cas9技术构建IL-15敲除的MGC-803胃癌细胞株[J].南京医科大学学报,2016,(2):140~143
应用CRISPR/Cas9技术构建IL-15敲除的MGC-803胃癌细胞株
Constration of IL-15 knockout MGC-803 cell line by CRISPR/Cas9 technology
投稿时间:2016-01-03  
DOI:10.7655/NYDXBNS20160203
中文关键词: IL-15  CRISPR/Cas9系统  基因敲除
英文关键词: IL-15  CRISPR/Cas9 system  gene knockdown
基金项目:国家自然科学基金资助(81472334,81270214)
作者单位
俞 静 江苏大学医学院检验系,江苏 镇江 212013 
孙 丽 江苏大学医学院检验系,江苏 镇江 212013 
孙晓仙 江苏大学医学院检验系,江苏 镇江 212013 
陈志红 江苏大学附属人民医院外科,江苏 镇江 212001 
钱 晖 江苏大学医学院检验系,江苏 镇江 212013 
许文荣 江苏大学医学院检验系,江苏 镇江 212013
江苏大学附属医院检验科,江苏 镇江 212001 
朱 伟 江苏大学医学院检验系,江苏 镇江 212013 
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中文摘要:
      目的:运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,建立IL-15基因敲除的MGC-803胃癌细胞株?方法:针对IL-15基因作用的功能域,设计了靶向IL-15基因Exon2的gRNA? 构建PX458-gRNA重组质粒并转化感受态细胞Stbl3,筛选出重组子后进行测序,通过测序确认了所设计的gRNA的有效性?并进一步通过流式细胞分选以及ELISA法检测筛选出的MGC-803胃癌细胞株IL-15基因的表达水平?结果:测序结果显示敲除质粒构建成功,与阴性对照组相比,转染PX458-IL-15-gRNA质粒组IL-15的表达水平明显低于阴性对照组,差异具有统计学意义(P < 0.001)?结论:利用CRISPR-Cas9系统成功构建了IL-15基因敲除的MGC-803 细胞,为后续研究IL-15在肿瘤中的作用机制和功能奠定了基础?
英文摘要:
      Objective:To construct IL-15 knockout MGC-803 cells by using CRISPR/Cas9 genome engineering technology. Methods:Guid RNA was designed by trageting the second exon of IL-15 gene,which encoded its homeodomains. PX458-gRNA recombinant plasmid was constructed and transformed into competent Stbl3. To confirm the efficitiveness of designed gRNA,the recombinan was screened and sequenced. The expression of IL-15 gene of MGC-803 cells sorted through FACS was detected by ELISA, and the cell cycle was detected by FACS. Results:Compared with negative control group,the expression of IL-15 transfected with PX458-IL-15-gRNA plasmid was significantly lower (P < 0.001). Conclusion:The IL-15 konctout gastric cancer cell line(MGC-803 cells)had been successfully constructed by using CRISPR/Cas9 system,which lays the foundation for further study of the mechanism and founction of IL-15 in tumors.
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