文章摘要
孙 卓,卢今奇,吴牧雨,白 璐,魏璐璐,李明岩,吴永平.干扰PTEN基因表达对人宫颈癌细胞系HeLa细胞周期的影响及相关机制研究[J].南京医科大学学报,2018,(9):1175~1180
干扰PTEN基因表达对人宫颈癌细胞系HeLa细胞周期的影响及相关机制研究
Effects and mechanism of PTEN⁃specific shRNA on cell cycle in human cervical carcino⁃ma cell line HeLa
投稿时间:2017-06-16  
DOI:10.7655/NYDXBNS20180901
中文关键词: PTEN  HeLa  细胞周期  Cyclin B1  CDK1
英文关键词: PTEN  HeLa  cell cycle  Cyclin B1  CDK1
基金项目:国家自然科学基金(81372479,81502387);江苏省普通高校研究生科研创新课题(KYLX16_1134);徐州市科技计划项目(KC15SH069)
作者单位
孙 卓 徐州医科大学基础医学院病理学教研室临床与实验病理学实验室江苏 徐州 221004 
卢今奇 徐州医科大学基础医学院病理学教研室临床与实验病理学实验室江苏 徐州 221004 
吴牧雨 徐州医科大学基础医学院病理学教研室临床与实验病理学实验室江苏 徐州 221004 
白 璐 徐州医科大学基础医学院病理学教研室临床与实验病理学实验室江苏 徐州 221004 
魏璐璐 徐州医科大学基础医学院病理学教研室临床与实验病理学实验室江苏 徐州 221004 
李明岩 徐州医科大学基础医学院病理学教研室临床与实验病理学实验室江苏 徐州 221004 
吴永平 徐州医科大学基础医学院病理学教研室临床与实验病理学实验室江苏 徐州 221004 
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中文摘要:
      目的:研究干扰PTEN表达对HeLa细胞细胞周期分布的影响并探索其相关机制。方法:以人宫颈癌细胞系HeLa为实验对象,利用慢病毒转染技术导入PTEN?特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰PTEN表达,采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测转染前后PTEN及细胞周期蛋白Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期分布变化,蛋白酶体抑制剂MG?132处理细胞后利用Western blot检测Cyclin B1蛋白稳定性变化。结果:PTEN shRNA作用HeLa细胞后,PTEN mRNA及蛋白表达水平较对照组显著降低;下调PTEN表达后,细胞周期中G2/M期细胞比例与对照组相比明显增加,Cyclin B1蛋白表达水平下降,但Cyclin B1 mRNA水平与对照组相比无明显差异。MG?132处理细胞后,PTEN干扰组中Cyclin B1蛋白表达与未处理组相比明显增加。结论:在HeLa细胞中干扰PTEN表达会导致细胞周期阻滞于G2/M期,这可能与细胞周期相关蛋白Cyclin B1表达水平降低有关。
英文摘要:
      Objective:To investigate the effect of down?regulating PTEN on cell cycle in HeLa cells and to explore its underlying mechanism. Methods:PTEN?specific short hairpin RNA(shRNA)was synthesized and introduced into HeLa cells via lentivirus. The mRNA and protein expression of PTEN and Cyclin B1 were detected by qPCR and Western blot assay,respectively. Cell cycle distribution was determined by flow cytometry. Cyclin B1 protein expression was examined by Western blot after proteasome inhibitor MG?132 treatment to evaluate its protein stability. Results:Compared to the control group,both mRNA and protein levels of PTEN were decreased in HeLa cells transfected with PTEN?specific shRNA. PTEN down?regulation in HeLa cells induced cell cycle arrest in G2/M phase,decreased Cyclin B1 protein level,but had no effect on Cyclin B1 mRNA level. After MG?132 treatment,the expression of Cyclin B1 protein in the PTEN interference group was significantly elevated. Conclusion:Inhibition of PTEN expression in HeLa cells led to cell cycle arrest in G2/M phase,which could be caused by decreased expression level of cell cycle related proteins(Cyclin B1).
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