目的：肺部多发结节行电视辅助胸腔镜手术（video-assisted thoracic surgery，VATS）时定位是个难点，探讨术前对肺部结节行三维重建，实现无创术中定位结节的可行性。方法：将42例肺部多发结节患者的术前胸部薄层增强CT数据导入OsiriX软件进行三维重建，进而制定手术方案并辅助术中定位寻找结节。结果：研究共纳入42例患者，共含104枚结节，手术均顺利切除结节病灶。术前规划符合率为95.2%，其中2例行楔形切除，因切缘不足更改为肺段切除。共79枚结节行楔形切除，23枚结节行肺段切除，2枚结节行肺叶切除。手术均在单孔胸腔镜下完成，术中无增加辅助孔和转开胸情况。术中及术后均未发生并发症。平均住院时间为（3.2 ± 1.8）d。术后结节病理恶性率为84.6%。结论：OsiriX软件重建在肺部多发结节VATS术前手术规划和术中定位中可以发挥重要作用，该方法简单、安全、可行，具有成功率高、无创、费用低的优势，值得临床推广应用。