文章摘要
李 涛,蒋 伟,顾 璇,李 冰,王静静,施 晓,郭娇娇,唐 奇,冯振卿,季国忠.全人源双特异性c⁃Met/PD⁃L1 scFv⁃Fc融合蛋白的优化、制备及生物学特性鉴定[J].南京医科大学学报,2019,(10):1415~1420
全人源双特异性c⁃Met/PD⁃L1 scFv⁃Fc融合蛋白的优化、制备及生物学特性鉴定
Optimization,construction and biological characterization of novel bispecific c⁃Met/PD⁃L1 scFv⁃Fc fusion protein
投稿时间:2019-02-27  
DOI:10.7655/NYDXBNS20191002
中文关键词: 双特异性单链抗体  c⁃Met  PD⁃L1
英文关键词: bispecific single chain antibody  c⁃Met  PD⁃L1
基金项目:国家自然科学基金面上项目(8177111723);江苏省科学技术厅重点研发专项基金(BE2016799)
作者单位
李 涛 南京医科大学第二附属医院消化医学中心江苏 南京 210011江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166 
蒋 伟 南京医科大学第二附属医院消化医学中心江苏 南京 210011江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166 
顾 璇 江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166南京医科大学病理学系江苏 南京 211166国家卫健委抗体技术重点实验室江苏 南京 211166 
李 冰 江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166南京医科大学病理学系江苏 南京 211166国家卫健委抗体技术重点实验室江苏 南京 211166 
王静静 南京医科大学第二附属医院消化医学中心江苏 南京 210011江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166 
施 晓 南京医科大学第二附属医院消化医学中心江苏 南京 210011江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166 
郭娇娇 江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166南京医科大学病理学系江苏 南京 211166国家卫健委抗体技术重点实验室江苏 南京 211166 
唐 奇 江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166南京医科大学病理学系江苏 南京 211166国家卫健委抗体技术重点实验室江苏 南京 211166 
冯振卿 江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166南京医科大学病理学系江苏 南京 211166国家卫健委抗体技术重点实验室江苏 南京 211166 
季国忠 南京医科大学第二附属医院消化医学中心江苏 南京 210011江苏省肿瘤个体化医学协同创新中心江苏 南京 211166 
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中文摘要:
      目的:通过优化设计、构建c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白,探究重轻链不同组合形式对c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白与肿瘤抗原结合的亲和性和特异性的影响。方法:使用生物信息学分析、基因工程抗体技术设计、优化及制备重轻链不同组合的双特异性c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白CP1、CP2、PC1、PC2;生物分子相互作用分析仪BLItz分析融合蛋白对重组c?Met蛋白和PD?L1蛋白的亲和力,ELISA法分析其抗原结合特异性。结果:成功制备双特异性c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白,融合蛋白CP1与重组c?Met蛋白和PD?L1蛋白的亲和力和抗原结合特异性均优于CP2、PC1和PC2。结论:重轻链不同组合形式会影响c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白与c?Met和PD?L1蛋白的亲和力和抗原结合的特异性,融合蛋白CP1的亲和力和抗原结合的特异性最高,其对应的重轻链组合形式可用于c?Met/PD?L1 CAR表达载体的构建。
英文摘要:
      Objective:To optimize,screen and identify the bispecific c?Met/PD?L1 scFv fusion protein and to detect whether the different combinations of heavy chains and light chains can influence the biological activity of bispecific scFv fragments. Methods:Bioinformatics analysis,technique of gene engineered antibodies were introduced to design,optimize and construct bi?specific scFv fusion proteins. BLItz was used to analyze the affinity of those bi?specific scFv fusion proteins to c?Met and PD?L1,ELISA assay was used to detect their specific binding ability. Results:Bispecific scFv fusion proteins were produced successfully,BLItz and ELISA detection confirmed that the bispecific scFv fusion protein CP1 has higher affinity and specific binding ability. Conclusion:Different combinations of heavy and light chains can affect the affinity and specific binding activity of c?Met/PD?L1 scFv?Fc fusion proteins,CP1 has the strongest affinity and specificity for binding to c?Met and PD?L1 protein,it can be applied to the construction of c?Met/PD?L1 expression vector and subsequent research of c?Met/PD?L1 CAR?T cells.
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