目的：探讨染色体核型分析和无精子因子（azoospermia factor，AZF）微缺失检测在男性不育中的应用。方法：对2017年1月—2020年6月在南京医科大学第一附属医院生殖医学科就诊的1 899例中重度少精子症和非梗阻性无精子症男性不育症患者，进行外周血染色体核型分析和AZF微缺失检测。结果：1 899例男性不育症患者检出225例染色体核型异常，染色体核型异常率为11.85%，最常见核型为47，XXY，占41.78%（94/225）；AZF微缺失215例，异常率为11.32%，最常见类型为AZFc区缺失，占69.30%（149/215）。结论：将染色体核型分析和AZF微缺失检测二者结合应用于临床寻找男性不育症的病因，可以提供更加明确的遗传学诊断。