Page 62 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 62

第41卷第6期
               ·840 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年6月


              等 ［13］ 的方法进行羧基化，按照制备 MB 的步骤制备                     10 、3.4×10 、4.8×10 mg/mL，AuNP 浓 度 为 4.0×
                                                                  -2
                                                                                     -2
                                                                            -2
              出羧基化空白微囊。之后将离心洗涤后的微囊悬                             10 mg/mL。激光照射距离均为 5 cm，光斑直径为
                                                                  -2
              浮在 MES 缓冲液（50 mmol/L，pH=5.4）中，向悬浮液                5 mm。
              中加入EDC·HCL（0.4 mg/mL）和NHS（0.6 mg/mL）激
                                                                2  结 果
              活微囊表面羧基，接着向激活后的悬浮液中加入
              PEI⁃AuNP，室温下孵育24 h后洗净样品并收集样品                      2.1  材料特性表征
              沉淀。最后将洗净后的样品加入西林瓶中冷冻干                                  15 nm 的 AuNP 包裹于微气泡气体内核中制备
              燥，加入质量分数5%的甘露醇作为冷冻保护剂，冷                           包AuMB，另外选用了15 nm的PEI⁃AuNP，通过PEI⁃

              冻干燥完成后向瓶中缓慢冲入氮气，得到 PEI⁃                           AuNP 表面的氨基与微气泡表面的羧基偶联制备了
              AuMB。                                             载 PEI⁃AuMB，AuNP 和 PEI⁃AuNP 的光吸收特性及
              1.2.3 材料的特性表征                                     其纳米颗粒内核尺寸大小没有区别（图 2）。对

                  使 用 透 射 电 子 显 微 镜（transmission electron       AuMB、PEI⁃AuMB 和 MB 进行扫描电镜和透射电镜
              microscope，TEM）（JEOL 公司，日本）和扫描电子显                 表征（图3）：MB表面光滑，内部有清晰的膜壳结构；
              微 镜（scanning electron microscope，SEM）（JEOL 公      AuMB内核中可见尺度为15 nm的纳米颗粒，证实了
              司，日本）观察 MB、AuMB 和 PEI⁃AuMB 的结构和形                  AuNP在微气泡内核的成功装载，此外，其表面偶见
              貌。使用粒度仪（Anton Paar 公司，奥地利）测定                      少许纳米颗粒，这是因为制备过程中，少量未被包
              MB、AuMB、PEI⁃AuMB 和金纳米颗粒的粒径分布和                     覆到微气泡内部的AuNP吸附到了微气泡表面；PEI
              Zeta 电位。使用酶标仪（Thermo Fisher 公司，美国）                ⁃AuMB的表面可见颗粒状物质，透射电镜结果也证
              测定 MB、AuMB、PEI⁃AuMB 和 AuNP 的紫外⁃可见光                实大量纳米颗粒分布于其膜壳表面，即是通过共价
              消光光谱。使用热分析仪（PerkinElmer 公司，美国）                    键偶联于微气泡表面。
              测定 MB、AuMB 和 PEI⁃AuMB 的差示扫描量热分析                        为研究AuNP的装载对微气泡粒径和稳定性的
              曲线。                                               影响，对 AuNP、PEI⁃AuNP、MB、AuMB 和 PEI⁃AuMB
              1.2.4 体外超声成像实验                                    的粒径分布和 Zeta 电位进行了检测（图 4）。AuNP
                  实验室制备了与人体软组织声阻抗相似的体
              模，体模中有一个用于注入样品的孔洞，将样品注
              入体模后，通过小动物超声系统（Visual Sonics 公
              司，加拿大）进行成像，超声探头频率为18MHz。
                  实验中 AuMB、PEI⁃AuMB 和 MB 的浓度均为
              1×10 个/mL，AuMB⁃1、AuMB⁃2、AuMB⁃3 的载金浓
                   8
                                       - 3
                              - 3
                                                - 2
              度分别为 5.5×10 、7.5×10 、2.1×10 mg/mL，PEI⁃                                  A                      B
                                                                                  25 nm                  25 nm
              AuMB⁃1、PEI⁃AuMB⁃2、PEI⁃AuMB⁃3的载金浓度分别
                                                                       C
              为1.6×10 、3.4×10 、4.8×10 mg/mL。所有实验都在                         0.8  AuNP
                      -2
                              -2
                                       -2
                                                                                PEI⁃AuNP
              相同条件下进行，即相同的温度、溶剂和超声成像                                       0.7
              参数。                                                          0.6
              1.2.5 体外光热转换能力实验                                            吸光度  0.5
                  将 0.2 mL 不同载金浓度的 AuMB 和 PEI⁃AuMB                         0.4
              加入到 96 孔板中，使用波长为 520 nm 的激光照射                                0.3
              15 min，其中激光器的功率分别选用 0.5、1.0、1.5、                                 400  450   500  550  600
              2.0 W，在激光照射过程中，使用热成像仪（FLIR 公                                             波长（nm）
                                                                   A：AuNP 的透射电镜图片；B：PEI⁃AuNP 的透射电镜图片；C：
              司，美国）实时记录溶液的温度，并设定MB和AuNP
                                                                AuNP和PEI⁃AuNP的紫光⁃可见光消光光谱。
              作为对照组。
                                                                图2   AuNP和PEI⁃AuNP的透射电镜图片及紫外⁃可见光消
                  本实验中AuMB、PEI⁃AuMB和MB的浓度均为1×                        光光谱
              10 个/mL，AuMB的载金浓度分别为5.5×10 、7.5×10 、              Figure 2  TEM images and optical extinction spectroscopy
                                                          -3
                8
                                                  -3
                    -2
              2.1×10 mg/mL，PEI⁃AuMB 的载金浓度分别为 1.6×                        of AuNP and PEI⁃AuNP
   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67