Page 10 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第12期
·1626 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年12月

采用Western blot检测细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62蛋白 白表达量增加（图 3B、C），此外 Western blot 结果显
+ 示，MPP 刺激后RSC96细胞内p⁃NF⁃κB/NF⁃κB水平
+
表达水平。结果显示，相比 PBS 组，MPP 组 LC3Ⅱ/
LC3Ⅰ表达量降低（图2A、B），同时P62水平升高（图 升高（图 3B、D）。以上结果均提示 MPP 诱导细胞
+
2A、C），提示MPP 抑制细胞自噬。 TLR2/NF⁃κB信号通路的激活。
+
+
+
2.3 MPP 诱导 RSC96 细胞 TLR2/NF⁃κB 信号通路 2.4 抑制TLR2缓解了MPP 诱导的细胞凋亡
的激活 为了进一步阐明TLR2/NF⁃κB信号通路在MPP +
采用 RT⁃qPCR 和 Western blot 分别检测细胞内 诱导的RSC96细胞凋亡中发挥的作用，使用TLR1/2
TLR2 转录和蛋白表达水平，结果显示，MPP 诱导 拮抗剂 CU⁃CPT22 抑制 TLR2 的表达。TUNEL 染色
+
RSC96 细胞内 TLR2 转录水平上调（图 3A），同时蛋 结果显示，抑制 TLR2 降低了 TUNEL 阳性细胞数目

A B C
PBS MPP + 2.0
LC3Ⅰ 16 kDa ** *
LC3Ⅱ/LC3Ⅰ P62蛋白相对表达量 1.0
LC3Ⅱ 14 kDa 1.5
1.0
β⁃actin 42 kDa 蛋白相对表达量 1.5
P62 62 kDa 0.5
β⁃actin 42 kDa 0.5
0 0
PBS MPP + PBS MPP +
A：Western blot 检测各组细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62蛋白表达水平代表性图像；B：各组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平的定量比较（n=3）；C：各
组P62蛋白表达水平的定量比较（n=3）。两组比较，P<0.05，P<0.01。
*
**
图2 MPP 诱导RSC96细胞自噬降低
+
Figure 2 MPP induces a decrease in autophagy in RSC96 cells
+
A B C D
2.5 PBS MPP + *
*** p⁃NF⁃κB 65 kDa 3 **
TLR2 mRNA 相对表达量 1.5 β⁃actin 65 kDa TLR2 蛋白相对表达量 4 2 p⁃NF⁃κB/NF⁃κB 蛋白相对表达量 1.5
2.0
1.0
NF⁃κB
1.0
42 kDa
0.5
0.5
TLR2
0 β⁃actin 89 kDa 1 0 0
42 kDa
PBS MPP + PBS MPP + PBS MPP +
A：RT⁃qPCR检测各组细胞TLR2 mRNA相对表达水平（n=8）；B：Western blot 检测各组细胞TLR2和p⁃NF⁃κB/NF⁃κB蛋白表达水平代表性
图像；C：各组 TLR2 蛋白表达水平的定量比较（n=3）；D：各组 p⁃NF⁃κB/NF⁃κB 蛋白表达水平的定量比较（n=3）。两组比较，P<0.05，P<0.01，
*
**
P < 0.001。
***
+
图3 MPP RSC96细胞诱导TLR2/NF⁃κB信号通路的激活
Figure 3 MPP stimulation induces activation of TLR2/NF⁃κB signaling pathway in RSC96 cells
+
（图4A、B）。RT⁃qPCR 结果显示，使用CU⁃CPT22可 白表达量增加（图5A、B），P62蛋白含量下降（图5A、
降低RSC96细胞TLR2 mRNA转录水平（图4C）。同 C），以上结果提示抑制 TLR2 可缓解 MPP 诱导的
+
时，使用 Western blot 检测细胞凋亡蛋白表达情况， RSC96 细胞自噬水平的下降，进一步说明 MPP 诱
+
结 果 显 示 ，与 MPP 组相比，MPP + CU ⁃ CPT22 组 导的 RSC96 细胞自噬水平下降与 TLR2/NF⁃κB 信
+
+
cleaved caspase3/caspase3水平下降（图4D、E），Bcl2/ 号通路激活有关。
Bax 表达量上升（图 4D、F），以上结果均提示抑制
3 讨 论
TLR2减轻了MPP 诱导的细胞凋亡。
+
+
2.5 抑制 TLR2 缓解了 MPP 诱导的细胞自噬水平 神经系统疾病是全世界残疾的主要来源，近年
的降低 来，PD患者的总数随着人口的增加而增加 ［17］ 。自主
+ 神经功能障碍作为PD 的临床表现之一困扰着大多
为了进一步明确TLR2/NF⁃κB信号通路在MPP
诱导的 RSC96 细胞自噬中发挥的作用，分别检测 数 PD 患者，其导致生活质量的下降以及死亡率的
MPP 刺激和 MPP 刺激的同时给予 CU⁃CPT22 后自 增加，因此越发受到人们的关注 ［18］ 。目前，PD 自主
+
+
噬相关蛋白水平。Western blot结果显示，相比MPP + 神经功能障碍的发生机制尚未明确，其治疗仍具有
组，MPP +CU⁃CPT22 组 PSC96 细胞 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋 挑战性。
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