Page 22 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第12期
               ·1638 ·                         南   京 医 科       大 学      学 报                        2023年12月


              0.2% DNFB 溶液刺激。此后每隔 2 d 给予小鼠颈背                    下检测吸光度并计算炎症因子浓度。
              部同样的刺激进行敏化，持续2周。                                  1.2.8 蛋白免疫印迹（Western blot）试验
              1.2.3 动物分组与处理                                          用含有蛋白酶抑制剂/磷酸酶抑制剂的RIPA裂
                  在白鲜皮醇提物抑制皮炎引起的慢性瘙痒研                           解液提取造模区域皮肤组织蛋白质，BCA试剂盒测
              究中，小鼠随机分为空白对照组、模型组、白鲜皮醇                           定蛋白浓度。每组加 30 μg 蛋白进行 SDS⁃PAGE 电
              提物组，每组6只。对照组按上述造模方法，采用不                           泳和转膜，5%的脱脂奶粉溶液封闭2 h，加入相应的
              含DNFB 的丙酮/橄榄油混悬液进行刺激，不予药物                         一抗4 ℃孵育过夜，TBST洗膜3次后，二抗室温孵育
              治疗。模型组和白鲜皮醇提物组均按上述方法进                             2 h。ECL显影并成像，使用Image J软件对所有条带

              行模型制备，模型组采用羧甲基纤维素钠（carboxy⁃                       进行灰度值分析。
              methylcellulose sodium，CMC⁃Na）灌胃治疗，白鲜皮            1.3  统计学方法

              醇提物组给予白鲜皮醇提物（300 mg/kg，溶于 0.5%                         使用 Prism 8 软件用于所有的数据分析和统计
              CMC⁃Na溶液中）灌胃治疗，均每天1次。                             图形绘制，数据以均值±标准差（x ± s）表示。采用非
                  在白鲜皮活性成分的抗皮炎作用研究中，小鼠                          配对 Student’s t 检验或单因素方差分析（ANOVA）
              随机分为模型组、白鲜碱组、黄柏酮组、梣酮组、地                           分析组间差异，使用Dunnett多重比较检验进行事后
              塞米松组（每组 8 只），均采用上述方法进行 AD 小                       分析。P < 0.05为差异有统计学意义。
              鼠模型制备。模型组采用 CMC⁃Na 灌胃治疗，其余
                                                                2  结 果
              组分别给予白鲜碱（10 mg/kg）、黄柏酮（10 mg/kg）、
              梣酮（10 mg/kg）、地塞米松（1 mg/kg）灌胃治疗，每天                 2.1  白鲜皮乙醇提取物对AD小鼠慢性瘙痒的影响
              1次，持续14 d。                                             与对照组相比，AD 小鼠抓痒次数不断增加，呈
              1.2.4 抓痒次数统计                                      现了强烈的搔抓行为，而给予白鲜皮醇提取物干
                  每天早晨固定时间在安静环境下利用高清摄                           预，能明显抑制特应性皮炎小鼠的抓痒。在造模第
              像机进行小鼠抓痒行为学录制，将小鼠后足抬起抓                            14天，空白对照组、模型组、白鲜皮醇提物组的抓痒
              挠颈背部的行为记作1次有效的抓挠。由1名不知                            次数分别为（34.3±5.7）次、（243.7±47.5）次、（119.3±
              晓实验分组的研究者统计每5 min间隔内小鼠抓痒                          33.0）次，差异有统计学意义（图1）。
              次数，共统计30 min。                                     2.2  黄柏酮、白鲜碱、梣酮对AD小鼠引起的慢性瘙
              1.2.5 皮损评分及体重变化评估                                 痒的影响
                  每 2 d 对小鼠颈背部的皮肤损害情况进行 1 次                          造模第14天，白鲜碱组、梣酮组、地塞米松组都
              评分。以小鼠皮肤损害的特征性症状（红斑、水肿、                           明显抑制了 AD 小鼠的强烈搔抓，但黄柏酮组的抓
              鳞屑/干燥、剥脱/糜烂、出血）为评分的基础，分为 0                        痒次数仍维持在较高水平，与模型组相比，差异无
              分（无症状）、1分（轻度症状）、2分（中度症状）、3分                       统计学意义（图2）。
             （重度症状）3个等级         ［19］ 。每2 d称量1次小鼠体重，             2.3  黄柏酮、白鲜碱、梣酮对小鼠AD小鼠皮炎症状
              监测造模期间小鼠体重变化。在造模第 14 天采用                          的影响
              高分辨率照相机拍摄小鼠颈背部皮损照片。                                    造模第 14 天，模型组小鼠的平均皮损评分为
              1.2.6 组织病理学分析                                     （2.60±0.24）分，黄柏酮组小鼠的平均皮损评分为
                  小鼠颈背部造模区域皮肤，4%多聚甲醛溶液中                         （2.71±0.18）分，两组均出现严重的结痂、剥脱、红斑
              固定过夜，蔗糖梯度脱水，包埋后采用莱卡冰冻切                            等症状。而白鲜碱组［（1.50±0.16）分］与梣酮组

              片机切片，厚度10 μm。进行苏木素⁃伊红（hematox⁃                    ［（1.22±0.22）分］小鼠的皮损评分明显降低，地塞米
              ylin⁃eosin，HE）和甲苯胺蓝染色，观察皮损区域皮肤                    松组小鼠的皮损评分［（1.62±0.26）分］也有一定程
              表皮厚度和肥大细胞数目变化。                                    度的改善（图 3A~C）。此外，模型组、黄柏酮组、地

              1.2.7 ELISA                                       塞米松组小鼠体重增幅略小于白鲜碱和梣酮组（图
                  切取 0.5 cm×0.5 cm 大小的皮肤组织，加入 PBS               3D~E）。
              缓冲液，充分匀浆离心后获得组织蛋白上清液，使                            2.4  黄柏酮、白鲜碱、梣酮对AD小鼠组织病理学变

              用 BCA 蛋白定量试剂盒定量蛋白浓度，采用 ELISA                      化的影响
              试剂盒检测IL⁃4、IL⁃31、IL⁃10水平。在450 nm波长                      造模第14天，模型组小鼠的表皮厚度显著增加
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