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第41卷第12期 匡 衡,蔡 欣,杨 展,等. 抗鼠疫抗原F1的嵌合抗体制备及特性分析[J].
2021年12月 南京医科大学学报(自然科学版),2021,41(12):1753-1758 ·1757 ·
M 1
kd
1.2
0.8
nm 70
0.4
0
-100 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
时间(s)
图8 Biacore T100 检测抗F1嵌合抗体亲和力
Figure 8 Biacore T100 assay results of human F1 anti⁃
body affinity ←16.46 kDa
15
1:嵌合抗体;M:Protein Ladder。
1.0
图10 嵌合抗体IP检测
Figure 10 Immunoprecipitation analysis of chimeric anti⁃
nm 0.5 body
人体内疗效不确定,安全性和实用性有待观察。
0 CHO⁃S 是一种常于生物制药的悬浮细胞系,该
-100 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
时间(s) 细胞系具有生长迅速,转染效率高,极少分泌内源
图9 Biacore T100 检测鼠源抗F1抗体亲和力 蛋白,产物蛋白分泌于胞外,又免去了细胞破碎这
Figure 9 Biacore T100 assay results of mouse F1 anti⁃ 一步骤,可以有效减少杂质蛋白对抗体的污染,是
body affinity
目前实验室中最适合生产单克隆抗体的细胞系之
异源单抗的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定 一 [10] 。本研究使用化学成分确定的 3 种培养基
区的表达载体中,转染哺乳动物细胞表达出嵌合抗 CHO MaxA、CHOMaxFA、CHO MaxFB悬浮培养CHO
体 [7-8] 。表面重塑抗体改变的氨基酸不多,人源化不 细胞,此 3 种培养基不含杂质蛋白,有效抑制了
彻底,在应用上具有安全隐患,而改型抗体改变了抗 Protein G柱纯化过程中杂质蛋白的产生 ,从而实现
[11]
体FR区基因,会降低抗体亲和度,影响抗体效果 。 抗体高表达,同时也利于精简抗体纯化步骤,缩减
[9]
本研究采用制备嵌合抗体的技术方法,成功获 抗体生产成本,有利于大量生产。而同样被广泛应
得了抗F1嵌合抗体,该抗体与F1抗原亲和力较强, 用于抗体生产的大肠杆菌系统,由于其极易产生内
但嵌合抗体仍保留较长鼠源基因序列,导致抗体在 毒素和包涵体的原因,未被本课题采用。
RT:0.00⁃60.00 39.89 NL:
100
39.86 39.93
95 7.87E9
90 Base Peak
85 MS F1
80
75
70
Relative Abundance 60 48.75 57.79
65
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10 26.11
5 12.97 19.68 19.96 29.93 32.75 34.05 40.19 44.20 52.31 55.97
1.06 7.04 7.39 9.45 18.96 34.52
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
时间(s)
图11 嵌合抗体质谱分析
Figure 11 Mass spectrometry analysis of chimeric antibodies