Page 8 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第12期
·1714 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年12月

Alamandine treatment of rat ADSCs with different concentrations showed that Alamandine promoted adipogenic differentiation of rat
ADSCs in an obvious dose⁃dependent manner. ADSCs of rats treated with 10 μmol/L Alamandine were detected at 1，3，6 and 10 days，

respectively. With the increase of treatment days，the degree of adipogenic differentiation gradually increased and reached its peak on the
10 th day. Ang Ⅱ single processing rat ADSCs inhibited adipogentic differentiation and the effect of Alamandine contributing to fat
differentiation is weakened with Ang Ⅱ. MrgD antagonist D⁃ Pro7 also inhibited the lipid differentiation effect of Alamandine on rat
ADSCs. Conclusion：Alamandine promotes lipid differentiation through MrgD on rat ADSCs. This may provide a new way to treat obesity.
［Key words］ alamandine；adipose⁃derived mesenchymal stem cells；adipogenic differentiation
［J Nanjing Med Univ，2021，41（12）：1713⁃1720，1727］

肥胖是全球范围内的一种健康问题，能引起多 量代谢的一个重要调节因子，在代谢紊乱如肥胖和
［7］
种疾病，如代谢综合征（高血脂、高三酰甘油血症和 胰岛素抵抗中起作用 。脂肪组织是一种高度活跃
2 型糖尿病等）、心血管疾病、慢性炎性反应和肿瘤 的代谢和内分泌器官，是RAS成分的来源之一。另
［1］
等，严重威胁人类健康 。大鼠脂肪来源的间充质 一方面，AngⅡ受体和Mas 受体在脂肪细胞共表达，
［8］
干细胞（adipose⁃derived mesenchymal stem cell，AD⁃ 意味着局部RAS系统参与调节脂肪细胞功能 。
SC）具有很强的增殖潜能，同时能够定向分化为成 已有研究表明，在人和小鼠3T3⁃L1前体脂肪细
骨细胞、肌源性细胞和脂肪细胞 。成熟脂肪细胞 胞中，Ang（1⁃7）⁃Mas 信号通过激活PI3K/Akt 和抑制
［2］
的形成有两个关键步骤，即成熟期和终末分化期。 MAPK 激酶/ERK 途径促进脂肪生成，Ang（1⁃7）⁃Mas
ADSC 在成熟期中被诱导成前脂肪细胞，在终末分 是通过抑制 AngⅠ⁃AT1 触发的 MAPK 激酶/ERK 途
化期定向分化为脂肪细胞 。脂肪分化过程受到多 径拮抗 AngⅠ⁃AT1 的抗脂肪生成作用 。AngⅠ/
［9］
［3］
个转录因子的调控，如过氧化物增殖激活受体γ AT1⁃ACE2⁃Ang（1⁃7）/Mas 轴对脂肪形成的自分泌
（peroxisome proliferator ⁃ activated receptor γ， 调节也已被揭示，表明了局部调节微妙平衡的
PPARγ）、CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT/enhanc⁃ RAS 对脂肪形成的重要性及其作为肥胖症和相关
［3］
er⁃binding protein α，C/EBPα）和脂蛋白脂肪酶等 。 代谢紊乱的新治疗靶点的潜力 ［8］ 。然而 Alaman⁃
除此之外，由于成脂分化伴随脂肪生成，所以负责 dine 对于脂肪生成的效应尚且未知。因此，阐明
脂肪生成的酶，例如脂肪酸合酶（fatty acid synthase， Alamandine 在ADSC成脂分化过程中的分子机制可
FAS）和乙酰辅酶 A 羧化酶（acetyl⁃CoA carboxylase， 能为肥胖症等代谢性疾病的治疗提供新的思路。
ACC）也被认为是脂肪生成的重要标志。
1 材料和方法
肾素⁃血管紧张素系统（renin⁃angiotensin sys⁃
tem，RAS）是体内非常重要的内环境稳定系统。 1.1 材料
RAS 在体内分布非常广泛，不仅存在于循环系统 DMEM 高 糖 培 养 基 、间 充 质 干 细 胞 培 养 基
中，在中枢神经系统、血管壁、肾脏、肾上腺等也有 （MSCM）（Gibco 公司，美国），间充质干细胞⁃脂肪细
［4］
广泛分布 。血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，Ang Ⅱ） 胞分化培养基（MADM，Scien Cell 公司，美国），胎牛
是RAS中的主要活性物质，是前体物质血管紧张素 血清（fetal bovine serum FBS）、青霉素、链霉素（Bio⁃
原在肾素作用下转化为血管紧张素Ⅰ（angiotensin logical Industries 公司，以色列），胶原酶 1 型（上海
Ⅰ，AngⅠ），再由血管紧张素转化酶（angiotensin on⁃ Biosharp 公司），油红 O、甘油三酯检测试剂盒、总胆
verting enzyme，ACE）催化生成。AngⅡ可以在胞外 固醇检测试剂盒（南京建成生物工程研究所），BCA

血管紧张素Ⅱ转化酶 2（angiotensin converting en⁃ 蛋白定量试剂盒、蛋白上样缓冲液（上海碧云天），
zyme 2，ACE2）作用下转化成血管紧张素1⁃7［angio⁃ PAGE 凝胶快速制备试剂盒（上海雅酶生物科技有
tensin（1⁃7），Ang（1⁃7）］，通过与Mas受体（一种G蛋白 限公司），BSA（ICN生物医学化学药品公司，美国），
偶联受体）的相互作用，Ang（1⁃7）通常拮抗AngⅡ的 辣根酶标记山羊抗小鼠 IgG、辣根酶标记山羊抗兔
作用 。Ang（1⁃7）可以脱羧成一种叫Alamandine 的 IgG（北京中杉金桥公司），β⁃actin抗体、ACC抗体、C/
［5］
肽。有趣的是，Alamandine 被发现是 Mas 相关 G 蛋 EBP⁃α抗体、PPAR⁃γ抗体、FAS 抗体（Cell Signaling

白偶联受体 D（mas associated G protein coupled re⁃ Technology 公司，美国），Alamandine（上海 Phoenix
［6］
ceptor D，MrgD）的内源性配体 。RAS 同样也是能 Pharmaceuticals公司），AngⅡ（Sigma公司，美国），D⁃