Page 8 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第5期
·638 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年5月

pIRES2SOX7 were co transfected into HEK293T cells，and the result displayed that the activity of pGL3S100A8⁃4 was much lower
than that in pGL3S100A8⁃FL and pGL3⁃S100A8⁃1~3，indicating that the region of rat S100A8 promoter（-200~+51 nt）might contain a
SOX7⁃binding element（-86~-57 nt）. Then the -86~-57 nt mutated plasmid（pGL3S100A8M）or pGL3S100A8FL and pIRES2SOX7
were co transfected into HEK293T cells，and the result revealed that the activity of pGL3S100A8⁃M was much lower than that of
pGL3S100A8FL，indicating that the SOX7 may bind to the element of rat S100A8 gene promoter -86~-57 nt. Conclusion：The rat full
length and truncated rat S100A8 promoter luciferase reporter plasmids were constructed successfully，and the possible SOX7 binding
element was preliminary determinated.
［Key words］ SRY⁃related HMG⁃box gene 7；S100 calcium binding protein A8；promoter；binding elements
［J Nanjing Med Univ，2021，41（05）：637⁃642］

大鼠 Thy⁃1 肾炎（Thy⁃1 nephritis，Thy⁃1N）是一 为了研究 Thy⁃1N 大鼠 GMC 中 S100A8 基因表

种公认的研究人类系膜增生性肾小球肾炎（mesan⁃ 达的转录调控机制，本课题组前期又筛查了Thy⁃1N
gial proliferative glomerulonephritis，MsPGN）的动物 大鼠肾组织内和体外受 sublytic C5b⁃9 刺激的大鼠
模型 ［1-2］ ，给大鼠注射抗Thy⁃1抗原的抗体后，该抗体 GMC中上调的转录因子，发现性别决定区Y框蛋白

能 与 大 鼠 肾 小 球 系 膜 细 胞（glomerular mesangial 7（SRY⁃related HMG⁃box gene 7，SOX7）的 mRNA 和
cells，GMC）表面的 Thy⁃1 抗原结合，继而激活补体， 蛋白表达均显著上升（资料未发表）。SOX7是一种
引起炎症反应和 GMC 增生病变。已知补体作用靶 含有高迁移率族框结构域的转录因子，可与启动子
细胞可分为全溶解型（lytic）和亚溶解型（sublytic）， 区DNA序列结合启动靶基因转录，发挥相应的生物
sublytic C5b⁃9 虽不能导致细胞溶破，但能促发多种 学功能。目前发现的SOX 家族根据HMG 结构的氨
生物学反应 。本课题组以往研究证实，Thy⁃1N 病 基酸序列分为 A、B1、B2、C、D、E、F、G 和 H 亚群，共
［3］
变具有补体 C5b⁃9 依赖性，尤其是 sublytic C5b⁃9 依 20余个成员，其中SOX7属于F亚群 ［16-17］ 。有文献报
赖性。Thy⁃1N大鼠肾组织内和体外受sublytic C5b⁃9 道，SOX7 作为抑癌基因可通过 Wnt/β⁃catenin 信号
刺激的大鼠 GMC 中，多种炎症因子如白介素（inter⁃ 通路抑制胶质瘤细胞的增殖 ［16］ 。此外，SOX7 还可
leukein，IL）⁃6、IL⁃23和IL⁃36a表达显著上调，且参与 通过Notch信号通路促进血管生成 ［18］ 。本课题组前
肾组织炎性病变 ［4-9］ 。但是，其他炎症因子或介质在 期实验发现，在大鼠 GMC 中过表达 SOX7 可上调
Thy⁃1N发病过程中发挥何种作用目前尚不知晓。 S100A8基因的表达（资料未发表），另生物信息学软
本课题组前期实验发现，Thy⁃1N大鼠肾组织中 件预测提示大鼠 S100A8 基因启动子区含有 SOX7
和体外受sublytic C5b⁃9刺激的大鼠GMC中，炎症介 的 结 合 元 件 ，但 是 上 调 的 SOX7 能 否 直 接 促 进
质 S100A8 的 mRNA 和蛋白表达均显著上调。S100 S100A8 基因的转录，目前尚不清楚，故本实验拟对
［10］
蛋白家族是仅存在于脊椎动物中的低分子量蛋白 ， 此问题展开研究。首先构建大鼠 S100A8 基因启动
于1965年由Moore 等 ［11］ 在牛脑中首次发现，因其可 子全长和截短质粒，与大鼠S100A8过表达质粒共同
100%溶于饱和硫酸铵而得名。S100 蛋白家族共 转染 HEK⁃293T 工具细胞，观察 SOX7 对 S100A8 基
计 20 余个成员，包括 S100A1⁃A18、S100B、S100P 因启动子活性的影响，同时筛选 SOX7 与 S100A8 基
等 ［12-13］ ，且具有组织和细胞特异性以及结合 Ca 的 因可能的结合元件，并对上述 SOX7 结合元件进行
2+
能力 ［12］ 。在损伤或应激等因素的作用下，S100蛋白 突变分析，拟为进一步研究 Thy⁃1N 大鼠 GMC 中
被释放到细胞外，促发组织炎症反应 ［13］ 。已发现， SOX7促进S100A8基因启动和转录的机制提供实验
S100 在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）、炎 依据。
症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）和狼疮肾
1 材料和方法
炎（lupus nephritis，LN）等免疫性疾病中发挥了重要
的促炎作用 。另有研究报道，在心肌梗死后发生的 1.1 材料
［14］
炎症中，梗死灶中的中性粒细胞释放的S100A8可与 人胚肾293T（HEK⁃293T）细胞购自美国模式培养
TLR⁃4结合，促进NLRP3炎症小体释放IL⁃1β，后者可 物集存库（American Type Culture Collection，ATCC）。
增强骨髓中粒细胞的分化，进而加重炎症反应 ［15］ 。 pGL3⁃basic 和 pRL⁃SV40 荧光素酶报告质粒以及双