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第41卷第5期 彭明玉，何庆玲，王文博，等. 大鼠S100A8基因启动子质粒的构建及其SOX7结合元件的初步鉴定［J］.
2021年5月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（05）：637-642 ·641 ·

50 20
* *
40 * * *
30 15
20 RLU值 10
RLU值 10 3

2 5 #
#
1 0
pGL3⁃S100A8⁃M
0 pGL3⁃basic pGL3⁃S100⁃FL
pGL3⁃S100A8⁃2
pGL3⁃S100A8⁃4
pGL3⁃basic pGL3⁃S100A8⁃1 pGL3⁃S100A8⁃3 pIRES2⁃SOX7+pRL⁃SV40
pGL3⁃S100⁃FL
#
*
pIRES2⁃SOX7+pRL⁃SV40 与 pGL3⁃basic 比较，P < 0.01；与 pGL3⁃S100A8⁃FL 比较，P <
0.01（n=3）。
*
与 pGL3 ⁃ basic 比 较 ，P < 0.01；与 pGL3 ⁃ S100A8 ⁃ FL、pGL3 ⁃
S100A8⁃1~3比较，P < 0.01（n=3）。 图 4 HEK⁃293T 细胞中 SOX7 对 S100A8 全长和突变启动
#
图 3 HEK⁃293T 细胞中 SOX7 对 S100A8 各截短质粒荧光 子质粒荧光素酶活性的影响
素酶活性的影响 Figure 4 The effect of SOX7 on the activity of full length
Figure 3 The effect of SOX7 on the activity of different and mutant of rat S100A8 promoter in HEK ⁃
truncated rat S100A8 promoter in HEK⁃ 293T 293T cells
cells
课题前期 GMC 细胞实验的结果一致，即转录因子
pGL3⁃basic、pGL3⁃S100A8⁃FL和pGL3⁃S100A8⁃M分 SOX7能够促进大鼠GMC中S100A8基因的表达。
别与pIRES2⁃SOX7质粒共转染HEK⁃293T细胞，于转 为了进一步确定大鼠 SOX7 与 S100A8 基因启
染48 h裂解细胞并检测各组荧光素酶活性。结果显 动子的结合部位，通过 JASPAR 软件预测发现大鼠
示，S100A8基因全长启动子-86~-57 nt突变后其荧 S100A8 基因启动子区可能存在 5 个 SOX7 结合元
光素酶活性显著降低，初步确定转录因子SOX7可通 件，并据此构建了4个大鼠S100A8基因启动子截短
过与-86~-57 nt区结合并上调S100A8的启动子活性 荧光素酶报告质粒，即 pGL3⁃S100A8⁃1~4。之后将
（图4）。 pGL3 ⁃ S100A8 ⁃ FL 或 pGL3 ⁃ S100A8 ⁃ 1~4 分 别 与
pIRES2⁃SOX7 和 pRL⁃SV40 共转染 HEK⁃293T 细胞，
3 讨 论
于48 h裂解细胞检测各组RLU值，结果表明，pGL3⁃
本课题组前期研究证实，大鼠Thy⁃1N发病过程 S100A8⁃4 荧光素酶活性显著低于 pGL3⁃S100A8⁃FL
中炎症介质 S100A8 和转录因子 SOX7 的表达均显 和 pGL3⁃S100A8⁃1~3，提示 SOX7 与 S100A8基因启
著上调，且体外用sublytic C5b⁃9刺激大鼠GMC后亦 动子的结合元件可能位于启动子-200~+51 nt 之间。
可明显增强 S100A8 和 SOX7 的表达。此外，在大鼠 而根据JASPAR软件预测结果，-200~+51 nt 区域含
GMC中过表达SOX7可显著上调S100A8的表达，另 有 1 个 SOX7 结合元件（-86~-57 nt，5′⁃GAAATGCT⁃
生物信息学软件预测提示，S100A8基因启动子区包 CAATGTGCTCAGTGATTGCCA C⁃3′），随后，将该结

含多个 SOX7 结合元件。因此推测，sublytic C5b⁃9 合元件进行序列突变，构建S100A8启动子全长突变
刺激大鼠 GMC 后可通过上调 SOX7 促进 S100A8 基 质粒即 pGL3⁃S100A8⁃M，并将 pGL3⁃S100A8⁃FL 和
因的转录和表达，进而加重Thy⁃1N的炎性病变。 pGL3⁃S100A8⁃M 分别与 pIRES2⁃SOX7 和 pRL⁃SV40
为了研究大鼠 SOX7 对 S100A8 基因启动的影 共转染 HEK⁃293T 细胞，于 48 h 裂解细胞检测各组
响，本实验构建了大鼠S100A8基因启动子全长荧光 荧光素酶活性。结果发现与pGL3⁃S100A8⁃FL相比，

素酶报告质粒（pGL3⁃S100A8⁃FL），将pGL3⁃S100A8⁃ pGL3⁃S100A8⁃M 组荧光素酶活性显著降低，提示
FL质粒与我们前期构建的pIRES2⁃SOX7质粒行不同 S100A8基因启动子-86~-57 nt区可能是SOX7结合
分组共转染HEK⁃293T细胞，转染48 h裂解细胞并测 元件。不过有关 SOX7 能否与该启动子区直接结
定其荧光素酶活性。结果发现，pGL3⁃S100A8⁃FL和 合，仍需要通过染色质免疫沉淀（chromatin immuno⁃
pIRES2⁃SOX7共转染组其荧光素酶活性显著高于其 precipitation，ChIP）实验进一步确证。
他组，提示过表达大鼠SOX7能够增强HEK⁃293T细 综上所述，本实验成功构建了大鼠S100A8基因
胞中大鼠S100A8基因的启动子活性，这一发现与本 启动子全长荧光素酶报告质粒，并在 HEK⁃293T 细