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第41卷第5期
               ·644 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年5月


              expressed on TFC were significantly higher. At the same time，TFC has a stronger ability to release GzmB［TFC（3.56±2.1）%；CXCR5 -
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              CD8 T cell（0.78±0.39）%，P < 0.05］and IFN⁃γ［TFC（43.65±12.25）%；CXCR5 CD8 T cell（21.92±3.72）%，P < 0.05］than CXCR5 -
                  +
              CD8 T cells. Conclusion：TFC exists and participates in the natural course of autoimmune diabetes in NOD mice，and promotes
              immune damage in NOD mice through cytotoxic effect.
             ［Key words］ follicular cytotoxic T cell；NOD mice；type 1 diabetes；immune damage
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2021，41（05）：643⁃651］



                  1型糖尿病（type 1 diabetes，T1D）是一种由环境                   非肥胖糖尿病（non⁃obese diabetic，NOD）小鼠因
              因素、基因组、代谢与自身免疫系统之间相互作用                            其遗传复杂性、对特定主要组织相容性复合体Ⅱ
              而引发的，以T细胞介导胰岛β细胞破坏，从而导致                           （major histocompatibility complex Ⅱ，MHC Ⅱ）类等
              胰岛素分泌减少或胰岛素绝对缺乏为特征的慢性                             位基因的易感性等方面近似于人类 T1D，而成为研
              自身免疫性疾病 。其免疫学发病机制主要是活化                            究 T1D 最主要的动物模型          ［12-13］ 。因此在本研究中，
                             ［1］
              的B细胞与CD4 和CD8 T细胞的相互作用。基因易                        选取NOD小鼠作为研究对象，通过观察TFC在不同
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              感性和病毒感染等环境因素导致带有β细胞抗原肽                            周龄 NOD 小鼠的不同组织中的表达量及其表达脱
              的B细胞抗原递呈，驱动了自身反应性CD4 T细胞的                         颗粒标记物白细胞分化抗原（cluster of differentia⁃
                                                    +
              激活，进而介导CD8 T细胞的活化。活化的CD8 T细                       tion 107a，CD107a）和重组人杀伤细胞凝集素样受
                                                        +
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              胞返回胰岛，通过释放穿孔素和颗粒酶以接触依赖                            体 G亚族成员1（recombinant human killer cell lectin⁃
              性方式杀伤胰岛β细胞。胰岛β细胞损伤后不断释                            like receptor subfamily G，member 1，KLRG1）、抑制性
              放胰岛自身抗原，诱导自身反应性CD4 和CD8 T细                        分子程序性死亡分子 1（programmed cell death pro⁃
                                                        +
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              胞对胰岛的进一步攻击，最终导致胰岛β细胞衰竭                            tein 1，PD⁃1）和T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构分子3
              引起T1D的发生。因此CD8 T细胞是T1D发生和进                        （T cell immunoglobulin mucin 3，TIM⁃3）的表达水平，
                                       +
              展的关键 ，而胰岛炎或免疫浸润胰岛则是该疾病                            以及其分泌干扰素γ（interferon γ，IFN⁃γ）、颗粒酶 B
                      ［2］
              的标志性病理学特征          ［3-4］ 。                        （granzyme B，GzmB）的能力，初步发掘与探讨TFC与
                  滤 泡 细 胞 毒 性 T 细 胞（follicular cytotoxic T      T1D之间存在的关联。
              cells，TFC）是一种特异性表达CXCR5 的CD8 T细胞
                                                      +
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              亚群（即CXCR5 CD8 T细胞），它可以抑制B细胞滤
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              泡中病原体感染细胞，也可能有助于记忆性特异性                            1.1  材料
              效应细胞毒性 CD8 T 细胞（cytotoxic T cells，TC）的                 雌性NOD小鼠（4~25周龄），购买于南京大学模
                                +
                  ［5］
              发育 。TC由机体感染后的抗原特异性CD8 T细胞                         式动物研究所。NOD 小鼠均在南京医科大学动物
                                                      +
              在次级淋巴器官的 T 细胞区中分化而成，其目的是                          中心无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级环
              为了清除感染细胞         ［6-7］ 。TFC的比例在慢性感染（如             境中喂养。此次实验中所有的过程及操作均遵守
              淋巴感染）中尤其高，TFC 通过 CXCR5 转录调节迁                      实验动物管理条例，符合南京医科大学实验动物福
              移至B细胞滤泡，表达低水平的抑制性受体，并且比                           利伦理审查委员会的规范，并获得伦理会的批准
              CXCR5 CD8 T细胞表现出更强的细胞毒性，在滤泡                       （IACUC 14030143⁃2）。
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              中发挥着清除病毒感染细胞的作用 。在肿瘤相关                                 抗 鼠 APC/Cy7 CD3 抗 体 、抗 鼠 PerCP/Cy5.5
                                              ［8］
              研究中发现，TFC在肿瘤组织和肿瘤相关淋巴结中富                          CD8a 抗体、抗鼠 PE CD185（CXCR5）抗体、抗人/鼠
              集，且在体外比CXCR5 CD8 T细胞更有效地介导肿                       Alexa Fluor700 CD44 抗体、抗鼠 APC CD279（PD⁃1）
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              瘤细胞死亡，具有抗肿瘤免疫的潜能                 ［9-11］ 。目前，对     抗 体 、抗 鼠 APC CD336（TIM ⁃ 3）抗 体 、抗 鼠 APC
              TFC的探索主要集中在慢性感染及肿瘤，在自身免疫                          CD107a 抗体、抗人/鼠 APC KLRG1 抗体、抗人/鼠
              性疾病中对这群细胞的表型、功能、来源、产生的机制                          FITC Granzyme B 抗体、抗鼠Brilliant Violet 421 IFN⁃
              以及与其他细胞之间的相互作用的研究少之又少。                            γ抗体（Biolegend公司，美国）。
              因此，基于TFC的既往研究结果，本文推测TFC在胰                              NaCl（汕头市西陇化工厂有限公司），KCl、
              岛炎进程中和T1D的致病环节或存在一定关联。                            Na2HPO4 · 12H2O、KH2PO4 · 12H2O、KHCO3、NH4Cl、
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