Page 16 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第5期
·646 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年5月

的分布是否存在差异，分别取小鼠脾脏、淋巴结（包 脾脏、淋巴结中的细胞比例较高，且脾脏中的表达
括胰腺周围引流淋巴结、腹股沟淋巴结、腋窝淋巴 量略高于淋巴结，但未达到统计学差异（各组 P >
结、腹主动脉旁淋巴结）和胸腺组织，提取组织中的 0.05，图 1B）。TFC在胸腺中几乎无表达。这一结果
淋巴细胞。参考慢性感染和癌症研究中对 TFC 表 提示，TFC主要存在于NOD小鼠的脾脏和淋巴结中，
型的探究，选定 CD3、CD8、CD44、CXCR5 为本研究 可能参与了NOD小鼠自身免疫性糖尿病的进展。
中 TFC 的抗体标记，染色后进行流式细胞检测， 2.2 发生高血糖前 TFC 细胞比例随 NOD 小鼠周龄
CD3 CD8 CD44 CXCR5 T细胞即为TFC（图1A）。实 延长而增高
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验结果表明，TFC 分布存在组织差异，在 NOD 小鼠 为观察 NOD 小鼠自身免疫性糖尿病自然病程
A B
脾脏 淋巴结 胸腺 15 淋巴结
10 5 CD3，CD8 10 5 CD3，CD8 10 5 CD3，CD8 脾脏
22.6 24.5 13.4 （ % ） 10
10 4 Comp⁃PerCP⁃Cy5⁃58⁃A::CD8 10 4 Comp⁃PerCP⁃Cy5⁃58⁃A::CD8 10 4 TFC

CD8 10 3 10 3 10 3 5
10 2 10 2 10 2 0 4 10 15 20 25 Hi组
10 2 10 3 10 4 10 5 10 2 10 3 10 4 10 5 10 2 10 3 10 4 10 5 NOD小鼠（周龄）
CD3
脾脏 淋巴结 胸腺
10 Q1 Q2 10 5 Q1 Q2 10 5 Q1 Q2
5
3.19 6.39 1.01 7.18 0.90 0.33
10 4 Comp⁃PE⁃A::CXCR5 10 4 Comp⁃PE⁃A::CXCR5 10 4
CXCR5 10 3 2 Q4 15.2 10 3 2 Q4 27.1 10 3 2 Q4 33.4
Q3
Q3
Q3
10
10
69.3
10 75.2
64.8
10 2 10 3 10 4 10 5 10 2 10 3 10 4 10 5 10 2 10 3 10 4 10 5
CD44
A：TFC（CD3 CD8 CD44 CXCR5 ）的典型流式图，TFC主要分布在脾脏和淋巴结中，胸腺中几乎无分布；B：分离4、10、15、20、25周及Hi组
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NOD小鼠的淋巴结和脾脏淋巴细胞并进行流式检测，TFC主要分布在脾脏和淋巴结中，但两组织间分布并无统计学差异（各组P > 0.05，n=3）。
图1 TFC在NOD小鼠不同免疫器官中的分布比例
Figure 1 Proportion and distribution of TFC in different immune organs of NOD mice
的不同阶段及发病后 TFC 的细胞比例在脾脏和淋 25周组，P < 0.01；4周组vs. Hi组，P < 0.05，图2B）和
巴结中的变化，分别选取了 4、10、15、20、25 周及高 淋巴结（4周组vs. 25周组，P < 0.000 1；10周组vs. 25
血糖组（Hi）NOD小鼠，分别代表自身免疫性糖尿病 周组，P < 0.01；15 周组 vs. 25 周组，P < 0.001；20 周
胰岛炎由轻到重的不同阶段，以及糖尿病发病的不 组 vs. 25 周组，P < 0.001；25 周组 vs. Hi 周组，P <
同疾病进程。将各组小鼠的脾脏和淋巴结分离出 0.01，图 2D）中均有下降。这一结果提示，TFC 确实
来，取其淋巴细胞并进行流式染色，流式图中CD44 + 参与了NOD小鼠自身免疫性糖尿病的自然病程，并
CXCR5 细胞群为 CXCR5 CD8 T 细胞（即 TFC）， 且根据先前其他研究的结果，推测TFC对淋巴细胞发
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CD44 CXCR5 细胞群为CXCR5 CD8 T细胞，以此观 挥着促炎和细胞毒性的作用，介导了胰岛β细胞的破
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察2种细胞比例的变化（图2A、C）。实验结果表明， 坏，推动了糖尿病的发病。
与 CXCR5 CD8 T 细胞相比，TFC 的细胞比例，无论 2.3 TFC 表达多种脱颗粒、抑制性标记物，且标记
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是在脾脏（4、10、15、20、25 周组、Hi 组，P < 0.000 1， 物表达水平均高于CXCR5 CD8 T细胞亚群
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图 2B）还是在淋巴结（4、20、25 周组、Hi 组，P < 为进一步探究 TFC 的细胞表型以及其可能发
0.001；10周组，P < 0.05；15周组，P < 0.01，图2D）中 挥的功能，根据在慢性感染和肿瘤中对TFC的既往研
均明显较低，仅占总 CD8 T 细胞比例的 3%~10%。 究成果，选取了表面标记物 CD107a、KLRG1、PD⁃1
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在 NOD 小鼠发病前，随着小鼠周龄延长、胰岛炎程 和TIM⁃3，对 4、10、15、20、25 周及 Hi 组 NOD 小鼠的
度的加重，TFC细胞比例呈现逐渐增高趋势，但是在 脾脏淋巴细胞进行流式染色分析。虽然 CXCR5 +
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小鼠发生高血糖后，TFC细胞比例在脾脏（4周组vs. CD8 T 细胞（即 TFC）的细胞比例明显低于 CXCR5 -