Page 19 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第4期 王碧蕾，夏宝妹，金 虹，等. 有氧运动联合外源性脑源性神经营养因子协同增强心肌血管
2022年4月 生成效应［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（4）：466-475 ·469 ·

（phospho Y515）、1∶800 稀释的抗 Akt 多克隆抗体和 烷吸入麻醉下进行经胸超声心动图检测，用来评估
兔抗磷酸化Akt多克隆抗体，4 ℃下孵育过夜，TBST 心功能。选取频率为 12 MHz 的超声探头进行心脏
缓冲液洗涤3次、10 min/次；随后以1∶800稀释的二 大小和功能参数的采集，用高分辨率超声 Vevo770
抗室温孵育 1 h，TBST 缓冲液洗涤 3 次、15 min/次， 系统进行数据分析。探头放置于大鼠左前胸，在心
加入化学发光试剂显色，胶片行显影、定影后扫描。 脏乳头肌水平进行 M 型超声检测，测量舒张末期
1.2.4 Transwell小室测定HUVEC迁移能力 左心室内径（left ventricular internal diameter at end⁃
将HUVEC随机分为对照组（Ctrl 组）、非循环SS diastole，LVIDd）、收缩末期左室内径（left ventricular
组、循环SS组、BDNF组、循环SS+BDNF组，干预6 h internal diameter at end⁃systolic，LVIDs），系统自动算
8
后取出，消化重悬细胞，调整为5×10 个/L，吸取0.1 mL 出射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）、
细胞悬液加入上室，置于 37 ℃、5% CO2培养箱中， 短 轴 缩 短 率（left ventricular fraction shortening，
18 h 后取出滤膜，4%多聚甲醛固定 10 min，PBS 冲 LVFS）。所有检测指标均取3个心动周期的平均值，
洗，棉签拭去上室表面内残存细胞，结晶紫染色。 超声测量依据美国超声心动图学会制定的标准。
显微镜下随机选取 5 个清晰的视野拍照，计算每个 1.2.8 免疫组化检测心肌血管密度
视野穿膜细胞数取平均值。 最后一次运动训练完成后 3 h，每组取 6 只大
1.2.5 小管形成实验检测HUVEC体外血管生成能力 鼠，迅速摘取大鼠心脏，沿心梗结扎线以下取部分

将HUVEC随机分为对照组（Ctrl 组）、非循环SS 左心组织经4%多聚甲醛固定，石蜡包埋后切片，常
组、循环SS组、BDNF组、循环SS+BDNF组，干预6 h 规脱蜡至水，经抗原修复后，用 3% H2O2 消除内源
后取出，消化重悬细胞，调整为 5×10 个/L。将细胞 性过氧化物酶活性，抗原修复，滴加兔抗CD34多克
7
外基质胶溶解后铺于 96 孔板，细胞培养箱中孵育 隆抗体 4 ℃过夜，PBS 冲洗 3 次，加入二抗 37 ℃孵
60 min。将上述细胞悬液加入96孔板（300 μL/孔）， 育 60 min，PBS 冲洗 3 次，用 DAB 显色，再经苏木素
每组设置 3 个复孔，继续培养 18 h。每组随机选取 复染，最后脱水、透明、封片。显微镜下观察，CD34
5 个视野于倒置显微镜下观察、拍照并统计其每个 主要表达在血管内皮细胞中，呈黄色至褐色。每张
视野下小管形成数量，取均值。 免疫组化切片随机选择10个视野，计数阳性血管总
1.2.6 动物造模、分组和干预措施 数。毛细血管判断标准：以黄染的血管内皮细胞为
雄性 SD 大鼠随机分为 5 组、每组 12 只，分别为 标准，数个血管内皮细胞围成管腔，直径小于10 μm
假手术组（Sham）、心肌梗死组（MIC）、心肌梗死+ 或单细胞管腔均作为1个毛细血管计数。
BDNF 组（MICB）、心肌梗死+运动组（MIE）、心肌梗 1.3 统计学方法
死+运动+BDNF 组（MIEB）。心梗模型制备：使用戊 采用SPSS19.0软件进行统计学分析，实验流程
巴比妥钠（0.2 mL/10 g）腹腔注射麻醉，建立呼吸支 重复3次，数据用均数±标准差（x ± s）表示。多组间
持，行冠状动脉左前降支结扎术，结扎成功后，左心 比较采用单因素方差分析，两两比较采用 SNK 检
室前壁会变苍白并且运动异常，逐层关胸。假手术 验，P < 0.05为差异有统计学意义。
组只开胸穿线，不结扎冠状动脉，手术时间与其他
2 结 果
组匹配。有氧运动：参照Morais等 的方法，采用跑
［9］
台的方式进行有氧运动训练。心梗手术后1周开始 2.1 LSS干预对BDNF表达的影响
跑台适应训练，训练时长从 10 min/d 开始，逐日增 循环流体和非循环流体产生的 LSS 分别干预
加，至第 5 天达到 60 min/d 并长期维持至训练结 HUVEC 0、15、30、60 min。循环流体中 BDNF 蛋白

束。训练速度从5 m/min开始，逐渐增加到20 m/min 浓度随着干预时间延长逐渐增高，各时段间差异有
并长期维持至训练结束。跑步机坡度从0°开始，逐 统计学意义（P < 0.05，图 2A）。两种流体干预下，
渐增加到25°。每周训练5 d、休息2 d，共训练4周。 HUVEC 中 BDNF 蛋白表达水平均随干预时间延长
MICB 和 MIEB 组大鼠在运动前 10 min 尾静脉注射 而逐渐升高，各时段间差异有统计学意义（P < 0.05，

BDNF蛋白0.4 μg/kg ［10-11］ 。 图2B、C）。
1.2.7 心功能检测 2.2 LSS干预过程中流体BDNF水平对TrkB磷酸化
心梗手术后 1 周、运动方案实施前以及最后一 的影响
次运动训练完成后48 h，每组分别取6只大鼠，异氟 循环流体和非循环流体产生的 LSS 分别干预