Page 8 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第4期
               ·458 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年4月


             ［Key words］ low⁃intensity pulsed ultrasound；obesity；adipocyte hypertrophy；adipogenic differentiation；lipolysis
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2022，42（04）：457⁃465］







                  食源性肥胖已经成为全球性的公共卫生问题，                          术有限公司）；60% kcal 脂肪的高脂饲料（D12492）
              超重或肥胖人群数量在全球范围内持续增长 ，过                            和10% kcal脂肪的低脂对照饲料（D12450J）（Research
                                                       ［1］
              多能量摄入造成白色脂肪组织的病理性扩增是导                             Diets 公司，美国）；甘油三酯检测试剂盒（南京建成
              致食源性肥胖的重要原因。肥胖过程中脂肪组织                             生物工程所）；4%多聚甲醛（合肥白鲨生物公司）；
              会发生反应性生长重塑，主要表现为脂肪细胞的增                            PBS缓冲液（Gibco公司，美国）；DEPC水（上海碧云天
              生和肥大。脂肪细胞增生主要表现为功能正常的                             生物技术有限公司）；TRIzol、逆转录试剂盒（TaKaRa
              脂肪细胞数目增多，是糖代谢、胰岛素、瘦素等指标                           公司，日本）；SYBR Green Master Mix（南京诺唯赞公
                                        ［2］
              相对正常的一种适应性改变 ；而脂肪细胞肥大主                            司）；qPCR 引物（南京金斯瑞生物科技有限公司）；
              要表现为脂肪细胞体积增大，同时伴有脂肪细胞功                            蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂（罗氏集团股份有限
              能障碍和胰岛素抵抗，是与2型糖尿病结局密切相关                           公司，瑞士）；RIPA 裂解液、苯甲基磺酰氟（phenyl⁃
              的重要病理性重塑        ［3-5］ 。脂肪细胞肥大是细胞内甘油               methylsulfonyl fluoride，PMSF）、5 × 蛋白上样缓冲
              三酯合成代谢大于分解代谢的结果。因此提高脂解                            液、BCA 蛋白定量试剂盒（上海碧云天生物技术有
              水平、降低成脂能力，控制脂肪细胞肥大，减少白色                           限 公 司）；牛 血 清 白 蛋 白（bovine serum albumin，
              脂肪的积聚扩张，是遏制肥胖进程，减少肥胖相关                            BSA）（Sigma公司，美国）；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰
              的代谢水平异常，提高肥胖患者预后的重要策略。                            胺凝胶快速制备试剂盒（上海雅酶生物科技有限公
                  目前对于肥胖的治疗主要包括体育锻炼、限制                          司）；二 氟 乙 烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜
              高热量饮食等生活方式的干预，以及相关药物治                             （Merck Millipore 公 司 ，美 国）；增 强 型 化 学 发 光
              疗。前者往往由于患者欠缺良好的依从性，无法达                            （ECL）试剂（ThermoFisher 公司，美国）；GAPDH 抗
              到理想的效果；潜在的药物不良反应又限制了后者                            体 、β ⁃ tubulin 抗 体 、C/EBPα 抗 体 、Phospho ⁃ HSL
              的广泛应用，且目前尚无针对肥大脂肪细胞并改善                            （ser563）抗体、Phospho⁃HSL（ser660）抗体、HSL 抗
              其病理状态的临床药物。因此迫切需要一种依从                             体、ATGL抗体、Phospho⁃ERK1/2抗体、ERK1/2抗体、
              性好、更安全、不良反应小的新方法来治疗肥胖。                            BAX 抗体、BCL⁃2 抗体（Cell Signaling Technology 公
                  低强度脉冲超声（low⁃intensity pulsed ultrasound，      司，美国）；PKA（催化亚基）抗体、PPAR⁃γ抗体（武汉
              LIPUS）是一种安全性高、无创且穿透性强的治疗超                         赛维尔生物科技有限公司）；辣根过氧化物酶标记
              声，以脉冲波的形式输出，其主要利用声波的机械                            山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG
              振动产生柔和持续的能量，能量强度远低于高强度                            （北京中杉金桥公司）。
                                    2 ［6］
              聚焦超声（< 500 mW/cm） ，而不会对器官造成损                      1.2  方法
              害 ［7-8］ 。本团队之前的研究已经发现利用 LIPUS 体                   1.2.1  实验设计
                                                ［9］
              外辐照可促进脂肪间充质干细胞凋亡 ，抑制前脂                                 4 周龄 C57BL/6J 雄性小鼠随机分为两组，普通
              肪细胞成脂分化        ［10］ ，而 LIPUS 是否能在体内改善脂            饮食组（普食组，10% kcal 脂肪的低脂对照饲料喂
              肪细胞的肥大状况尚不清楚。本研究拟建立食源                             养，n=10）和高脂饮食组（高脂组，60% kcal 脂肪的
              性肥胖小鼠，并对其进行超声干预，研究LIPUS对脂                         高脂饲料喂养，n=20）。动物每天自由摄食饮水，
              肪组织的生物学效应，并阐明其效应的分子学基                             每 48 h 称量并添加食物，同时称取未摄食完的食
              础，为肥胖患者的临床治疗提供一种安全、无创、易                           物，以评估食物摄入量，每周记录1次体重。在连续
              转化的新思路。                                           喂养 10 周后，高脂组小鼠根据体重配对，并随机分
                                                                为两组，继续高脂喂养。其中一组开始对腹股沟区
              1 材料和方法
                                                                脂肪垫进行LIPUS治疗（超声组，n=10），另一组除不
              1.1  材料                                           接受 LIPUS 辐照外，其余条件均与超声组保持一
                  C57BL/6J雄性小鼠（北京维通利华实验动物技                      致。连续治疗 10 周后对 3 组小鼠实施安乐死。采
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